Extraccion de dna
INTRODUCCIÓN
La extracción de ADN a menudo es un primer paso en muchos procesos de diagnóstico utilizados para detectar bacterias y virus en elmedio ambiente, así como el diagnóstico de la enfermedad y los trastornos genéticos
La extracción de ADN es un método que no altera la molécula física o químicamente, puede rendir ADN sincontaminantes (Proteínas, RNA) y es un método relativamente rápido y simple.
Etapas en la extracción de ADN
Los pasos necesarios para una correcta extracción y purificación del ADN mediante unprocedimiento químico son:
1.Lisis de las células : Consiste en el rompimiento de membranas celulares. Este rompimiento se lo puede realizar por varías vías: químicas (detergentes), mecánicas y enzimáticas.2. Degradación de la fracción proteica asociada al ADN: Por lo general se utiliza un detergente como SDS, y proteinasa K, para degradar y remover las proteínas presentes.
3. Purificación:Consta de 3 fases:
• Precipitación del ADN: El ADN es insoluble en alcohol, por lo que se puede precipitar etanol o isopropanol y recuperar mediante una centrifugación. El alcohol del sobrenadantese llevará las sales añadidas previamente.
• Lavado del pellet: Se realiza con etanol en concentraciones de 70 a 75%
• Recuperación de DNA: El sedimento se puede resuspender en agua o tampón TEtras ser secado completamente.
OBJETIVO
Describir las pautas, recomendaciones generales y principios para la extracción de ADN genómico, a partir de células nucleadas eucariotas.
Extracciónde ADN con DNAzol® Reagent
DNAzol® es un reactivo listo para utilizar para el aislamiento de ADN genómico de muestras sólidas y líquidas de animales, plantas, levaduras y bacterias. Elprocedimiento de este reactivo se basa en el uso de una solución de lisis la cual permite precipitar el ADN del lisado celular (Invitrogen, Cat. No. 10503-027)
REACTIVOS
DNAzol ®
Etanol 100%
Etanol 75%...
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