extraccion de el ADN
Páginas: 13 (3146 palabras)
Publicado: 30 de marzo de 2012
RESUMEN
El presente informe, representa una actividad de extracción del ADN, que será de gran utilidad en muchas aplicaciones de la medicina. Ya que la medicina del futuro es la genética, y el estudio de la genética comienza analizando el genoma, es importante conocer diferentes métodos que nos permitan extraerlo para poderlo analizar.
Es objetivo de este informe:
Denotar los diferentesmétodos disponibles para la extracción del DNA.
Ejemplificar un método que permitirá conocer como es que funciona la técnica en este tipo de procedimientos.
Aprender la metodología utilizada para la extracción del DNA.
Profundizar en la teoría para conocer algunos aspectos de aplicaciones clínicas y saber qué técnicas nos ofrecen mejor rendimiento.
Obtener DNA con un máximo grado de pureza,basado en la buena aplicación del método.
MARCO TEÓRICO
La molécula de ADN (que es la que se va a extraer en este laboratorio) está constituida por dos largas cadenas de nucleótidos unidas entre sí formando una doble hélice. Las dos cadenas de nucleótidos que constituyen una molécula de ADN, se mantienen unidas entre sí porque se forman enlaces entre las bases nitrogenadas de ambas cadenas quequedan enfrentadas.
La unión de las bases se realiza mediante puentes de hidrógeno, y este apareamiento está condicionado químicamente de forma que la adenina (A) sólo se puede unir con la Timina (T) y la Guanina (G) con la Citosina (C).
La estructura de un determinado ADN está definida por la "secuencia" de las bases nitrogenadas en la cadena de nucleótidos, residiendo precisamente en estasecuencia de bases la información genética del ADN. El orden en el que aparecen las cuatro bases a lo largo de una cadena en el ADN es, por tanto, crítico para la célula, ya que este orden es el que constituye las instrucciones del programa genético de los organismos.
Conocer esta secuencia de bases, es decir, secuenciar un ADN equivale a descifrar su mensaje genético.
La estructura en doblehélice del ADN, con el apareamiento de bases limitado ( A-T; G-C ), implica que el orden o secuencia de bases de una de las cadenas delimita automáticamente el orden de la otra, por eso se dice que las cadenas son complementarias. Una vez conocida la secuencia de las bases de una cadena, se deduce inmediatamente la secuencia de bases de la complementaria.
REPLICACIÓN DEL ADN
Es la capacidad quetiene el ADN de hacer copias o réplicas de su molécula. Este proceso es fundamental para la transferencia de la información genética de generación en generación.
Las moléculas se replican de un modo semiconservativo. La doble hélice se separa y cada una de las cadenas sirve de molde para la síntesis de una nueva cadena complementaria. El resultado final son dos moléculas idénticas a laoriginal.
Existen varios métodos para la purificación del ADN. Por ejemplo, con la extracción directamente de 300 ml. de sangre completa se puede utilizar el Kit comercial "Wizard genomic DNA purification kit" que sirve para purificar material genético de humanos, células en cultivo, tejidos animales, vegetales, levaduras y bacterias. Para la realización de este y otros métodos se debe seguir lasinstrucciones del fabricante, (esta técnica es la que vamos a utilizar en este laboratorio para purificar DNA, y se describirá posteriormente sus pasos para la obtención de dicho material). Con esta técnica, podemos utilizar posteriormente los análisis de DNA tales como amplificación (PCR), digestión con endonucleasas de restricción, southern blot o Dot blot.
Otros métodos son:
Método comercialInstaGene Matrix: donde también se extrae DNA a partir de sangre entera, diseñado para aislar DNA que posteriormente será utilizado en reacciones de PCR. En un tubo Eppendorf se agrega solución de Lysis Buffer (pH: 7.9) y sangre entera. Luego de varios lavados y centrifugaciones con este buffer, se descarta el sobrenadante y se agrega el InstaGene Matriz al pellet obtenido. Por último, se...
El presente informe, representa una actividad de extracción del ADN, que será de gran utilidad en muchas aplicaciones de la medicina. Ya que la medicina del futuro es la genética, y el estudio de la genética comienza analizando el genoma, es importante conocer diferentes métodos que nos permitan extraerlo para poderlo analizar.
Es objetivo de este informe:
Denotar los diferentesmétodos disponibles para la extracción del DNA.
Ejemplificar un método que permitirá conocer como es que funciona la técnica en este tipo de procedimientos.
Aprender la metodología utilizada para la extracción del DNA.
Profundizar en la teoría para conocer algunos aspectos de aplicaciones clínicas y saber qué técnicas nos ofrecen mejor rendimiento.
Obtener DNA con un máximo grado de pureza,basado en la buena aplicación del método.
MARCO TEÓRICO
La molécula de ADN (que es la que se va a extraer en este laboratorio) está constituida por dos largas cadenas de nucleótidos unidas entre sí formando una doble hélice. Las dos cadenas de nucleótidos que constituyen una molécula de ADN, se mantienen unidas entre sí porque se forman enlaces entre las bases nitrogenadas de ambas cadenas quequedan enfrentadas.
La unión de las bases se realiza mediante puentes de hidrógeno, y este apareamiento está condicionado químicamente de forma que la adenina (A) sólo se puede unir con la Timina (T) y la Guanina (G) con la Citosina (C).
La estructura de un determinado ADN está definida por la "secuencia" de las bases nitrogenadas en la cadena de nucleótidos, residiendo precisamente en estasecuencia de bases la información genética del ADN. El orden en el que aparecen las cuatro bases a lo largo de una cadena en el ADN es, por tanto, crítico para la célula, ya que este orden es el que constituye las instrucciones del programa genético de los organismos.
Conocer esta secuencia de bases, es decir, secuenciar un ADN equivale a descifrar su mensaje genético.
La estructura en doblehélice del ADN, con el apareamiento de bases limitado ( A-T; G-C ), implica que el orden o secuencia de bases de una de las cadenas delimita automáticamente el orden de la otra, por eso se dice que las cadenas son complementarias. Una vez conocida la secuencia de las bases de una cadena, se deduce inmediatamente la secuencia de bases de la complementaria.
REPLICACIÓN DEL ADN
Es la capacidad quetiene el ADN de hacer copias o réplicas de su molécula. Este proceso es fundamental para la transferencia de la información genética de generación en generación.
Las moléculas se replican de un modo semiconservativo. La doble hélice se separa y cada una de las cadenas sirve de molde para la síntesis de una nueva cadena complementaria. El resultado final son dos moléculas idénticas a laoriginal.
Existen varios métodos para la purificación del ADN. Por ejemplo, con la extracción directamente de 300 ml. de sangre completa se puede utilizar el Kit comercial "Wizard genomic DNA purification kit" que sirve para purificar material genético de humanos, células en cultivo, tejidos animales, vegetales, levaduras y bacterias. Para la realización de este y otros métodos se debe seguir lasinstrucciones del fabricante, (esta técnica es la que vamos a utilizar en este laboratorio para purificar DNA, y se describirá posteriormente sus pasos para la obtención de dicho material). Con esta técnica, podemos utilizar posteriormente los análisis de DNA tales como amplificación (PCR), digestión con endonucleasas de restricción, southern blot o Dot blot.
Otros métodos son:
Método comercialInstaGene Matrix: donde también se extrae DNA a partir de sangre entera, diseñado para aislar DNA que posteriormente será utilizado en reacciones de PCR. En un tubo Eppendorf se agrega solución de Lysis Buffer (pH: 7.9) y sangre entera. Luego de varios lavados y centrifugaciones con este buffer, se descarta el sobrenadante y se agrega el InstaGene Matriz al pellet obtenido. Por último, se...
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