EXTRACCION DE RNA
Páginas: 6 (1260 palabras)
Publicado: 20 de agosto de 2015
El RNA es la única molécula biológica con capacidad informativa y actividad enzimática. Las células contienen distintos tipos de RNA que juegan papeles específicos en la fisiología celular: El mRNA y el tRNA son intermediarios en la transmisión de la información genética en la célula; mientas que el rRNA juega un importantísimo papel en la traducción del mensajegenético como componente fundamental del ribosoma; otros RNAs con actividad catalítica (ribozimas) participan en distintas funciones celulares y finalmente, los sRNAs (small RNAs) son moléculas pequeñas que participan en la regulación de la expresión génica, además, el ARN está involucrado en la síntesis de proteínas y constituye el material genético de los retrovirus. La expresión de los geneses la base del metabolismo celular, y por ésta se entiende que el ADN se transcribe en ARN, que a su vez se traduce en proteínas. Esta secuencia ADN-ARN-proteínas constituye el dogma central de la biología molecular. De manera específica las funciones de cada uno de los ARN existentes es:
• El ARN mensajero (mARN), que se sintetiza durante la transcripción gracias a la ARN polimerasa, estáconformado por codones, que son secuencias de tres pares de bases que codifican un aminoácido en específico.
• El ARN de transferencia (tARN) que establece el vínculo entre el tARN y los aminoácidos, ya que en un extremo cuenta con un aminoácido y en el otro, con una secuencia de tres pares de bases llamada anticodón, a la que se une el codón del mARN.
• El ARN ribosomal (rARN), que constituye lamayor parte del ARN en las células, forma junto con proteínas a los ribosomas, que facilitan el acoplamiento específico entre el mARN y los tARN para la traducción; los ribosomas están compuestos por tres subunidades de rARN de diferentes tamaños en los eucariontes (23S, 18S y 5S) y procariontes (23S, 16S y 5S).
EXTRACCION DE RNA
En la extracción de RNA, una vez colectada la muestra, esnecesario agregarle una solución que estabilice al ARN lo antes posible, ya que los cambios en el patrón de expresión de los genes debido a la degradación del ARN o a inducciones en la transcripción ocurren inmediatamente.
Debido a su estructura química el ARN es una molécula muy frágil que puede romperse por acción de los grupos 2’-OH (altamente reactivos) adyacentes al esqueleto de ribosa-fosfato.
Alser un material extremadamente sensible se deben tomar precauciones para evitar la contaminación con ribonucleasas (RNasas) y su degradación éstas últimas son unas enzimas muy estables y activas que hidrolizan el RNA y no requieren de cofactores para Su función, por ser muy difíciles de inactivar, soportan el autoclavado y son insensibles a los métodos estándar para la inactivación de proteínaspor lo que Es importante trabajar en un ambiente libre de RNasas.
Principio del formulario
MÉTODOS DE EXTRACCIÓN DEL ARN
La mayoría de protocolos para extracción de ARN están basados en el método descrito por Chomezynski y Sacchi, el cual se basa en el aislamiento de este ácido nucleico empleando fenol-cloroformo e isotiocianato de guanidina. Durante el procedimiento debe realizarse una etapa dehomogenización de la muestra con el (los) reactivo (s) que contengan la solución fenol-isotiocianato, donde este último se encarga de conservar la integridad del ARN, mientras rompe las células y disuelve sus componentes, la adición posterior de cloroformo separa la solución en fase acuosa y orgánica, donde la primera de estas contiene el ARN, esta fase acuosa es posteriormente tratada conisopropanol para recuperar por precipitación el ARN.
GIPS
El método utilizado con más frecuencia es el de GIPS (por sus siglas en inglés; acido tiosanato de guanidina, fenol, sarcosyl). Cada uno de estos componentes juega un papel específico:
1. El ácido tiosanato de guanidina es sumamente fuerte y tiene un alto poder desnaturalizante.
2. El fenol, al estar acidificado, provoca que el ADN se...
El RNA es la única molécula biológica con capacidad informativa y actividad enzimática. Las células contienen distintos tipos de RNA que juegan papeles específicos en la fisiología celular: El mRNA y el tRNA son intermediarios en la transmisión de la información genética en la célula; mientas que el rRNA juega un importantísimo papel en la traducción del mensajegenético como componente fundamental del ribosoma; otros RNAs con actividad catalítica (ribozimas) participan en distintas funciones celulares y finalmente, los sRNAs (small RNAs) son moléculas pequeñas que participan en la regulación de la expresión génica, además, el ARN está involucrado en la síntesis de proteínas y constituye el material genético de los retrovirus. La expresión de los geneses la base del metabolismo celular, y por ésta se entiende que el ADN se transcribe en ARN, que a su vez se traduce en proteínas. Esta secuencia ADN-ARN-proteínas constituye el dogma central de la biología molecular. De manera específica las funciones de cada uno de los ARN existentes es:
• El ARN mensajero (mARN), que se sintetiza durante la transcripción gracias a la ARN polimerasa, estáconformado por codones, que son secuencias de tres pares de bases que codifican un aminoácido en específico.
• El ARN de transferencia (tARN) que establece el vínculo entre el tARN y los aminoácidos, ya que en un extremo cuenta con un aminoácido y en el otro, con una secuencia de tres pares de bases llamada anticodón, a la que se une el codón del mARN.
• El ARN ribosomal (rARN), que constituye lamayor parte del ARN en las células, forma junto con proteínas a los ribosomas, que facilitan el acoplamiento específico entre el mARN y los tARN para la traducción; los ribosomas están compuestos por tres subunidades de rARN de diferentes tamaños en los eucariontes (23S, 18S y 5S) y procariontes (23S, 16S y 5S).
EXTRACCION DE RNA
En la extracción de RNA, una vez colectada la muestra, esnecesario agregarle una solución que estabilice al ARN lo antes posible, ya que los cambios en el patrón de expresión de los genes debido a la degradación del ARN o a inducciones en la transcripción ocurren inmediatamente.
Debido a su estructura química el ARN es una molécula muy frágil que puede romperse por acción de los grupos 2’-OH (altamente reactivos) adyacentes al esqueleto de ribosa-fosfato.
Alser un material extremadamente sensible se deben tomar precauciones para evitar la contaminación con ribonucleasas (RNasas) y su degradación éstas últimas son unas enzimas muy estables y activas que hidrolizan el RNA y no requieren de cofactores para Su función, por ser muy difíciles de inactivar, soportan el autoclavado y son insensibles a los métodos estándar para la inactivación de proteínaspor lo que Es importante trabajar en un ambiente libre de RNasas.
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MÉTODOS DE EXTRACCIÓN DEL ARN
La mayoría de protocolos para extracción de ARN están basados en el método descrito por Chomezynski y Sacchi, el cual se basa en el aislamiento de este ácido nucleico empleando fenol-cloroformo e isotiocianato de guanidina. Durante el procedimiento debe realizarse una etapa dehomogenización de la muestra con el (los) reactivo (s) que contengan la solución fenol-isotiocianato, donde este último se encarga de conservar la integridad del ARN, mientras rompe las células y disuelve sus componentes, la adición posterior de cloroformo separa la solución en fase acuosa y orgánica, donde la primera de estas contiene el ARN, esta fase acuosa es posteriormente tratada conisopropanol para recuperar por precipitación el ARN.
GIPS
El método utilizado con más frecuencia es el de GIPS (por sus siglas en inglés; acido tiosanato de guanidina, fenol, sarcosyl). Cada uno de estos componentes juega un papel específico:
1. El ácido tiosanato de guanidina es sumamente fuerte y tiene un alto poder desnaturalizante.
2. El fenol, al estar acidificado, provoca que el ADN se...
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