Extraccion declorofilas

INFORME DE
ESPECTROFOTOMETRIA
CATEDRA DE FISICA
FFYB

COMISION 2A

GRUPO: 6

INTEGRANTES:
I
PARTE 1: CONTROLES
Objetivos:
Realizar los siguientes controles al equipo;
-Luz espuria
-Volumen mínimo
-Cubetas
-Centro de Banda
-Linealidad fotométrica

Fundamentos:
La técnica espectrofotométrica está basada en la interacción de las radiaciones electromagnéticas con la materia ybasa su utilidad en la determinación de concentraciones midiendo el efecto que dicha concentración tiene sobre la intensidad de un haz luminoso que incide sobre la solución.
Para realizar el trabajo práctico de espectrofotometría, es necesario llevar a cabo diferentes controles de determinados parámetros y así, poder verificar si la calidad de los resultados que se obtienen se encuentra dentro delrango de aceptabilidad permitido, lo que demuestra el correcto funcionamiento del espectrofotómetro. A continuación se fundamentan los controles espectrofometricos que se les realiza a los equipos cada vez que se los usa:
Control de luz espuria: Determina la presencia de luz que llega al detector sin haber atravesado la solución cuya absorbancia queremos medir. Para que la lectura sea válida elporcentaje de luz espuria debe ser menor al 1%.
Control de centro de banda: Indica la correlación entre la longitud de onda leída en el selector y la real. Asegura la lectura de la correcta longitud de onda donde se encuentra el maximo de absorción del cromógeno, evitando la pérdida de sensibilidad.
Control de volumen mínimo: Asegura que toda la luz pase por la solución.
Control de cubetas:Asegura que la variación de las cualidades ópticas de dos cubetas no difieran en más de un 1%.
Control de linealidad fotométrica: Indica si el espectrofotómetro responde linealmente a la ley de Lambert-Beer.
Control de veracidad: Luego de verificar los controles anteriores, se realiza este control permitiendo analizar la veracidad de los resultados obtenidos en el equipo que se está calibrando, apartir de la relación entre la absorbancia de referencia y la absorbancia medida para la misma solución
Materiales y MÉTODOS: Ver guía TP de Espectrofotometría Modulo 4, v. 1.1.
Resultados:
Equipo: Espectrofotómetro Jenway 6300 n°2.
Control de Luz espuria a 550nm. Transmitancia: 0%
Tabla N° 1: Control de volumen mínimo a 550nm, con solución Rojo Fenol Acido (1/5).
Volumen (mL) | Absorbancia(± 0,001) |
0,5 | 0,026 |
0,7 | 0,021 |
1,0 | 0,222 |
2,0 | 0,300 |
2,5 | 0,300 |
3,0 | 0,300 |
3,5 | 0,300 |

GRAFICO N°1: Control de volumen mínimo a 550nm, con solución Rojo Fenol Acido (1/5).

Volumen estable: (2,0 ± 0,1) mL
Volumen mínimo a utilizar: (2,4 ± 0,1) mL
Tabla N° 2: Control de cubetas a 550nm, con solución Rojo Fenol Acido (1/5).
Cubeta | Transmitancia (±0,1)% |
1 | 49,7 |
2 | 50,4 |
ΔT | 0,7 |

Se pudo utilizar ambas cubetas porque la diferencia de Transmitancia entre ellas no supera el 1%.
Tabla N° 3: Control de centro de bandas, con solución Rojo Fenol Acido (1/5).
λ (±1)nm | Absorbancia (± 0,001) |
520 | 0,152 |
525 | 0,169 |
530 | 0,187 |
535 | 0,209 |
540 | 0,234 |
545 | 0,266 |
550 | 0,297 |
555 | 0,318 |
560 |0,319 |
565 | 0,289 |
570 | 0,231 |
575 | 0,160 |
580 | 0,108 |
585 | 0,065 |
590 | 0,036 |
595 | 0,021 |

GRAFICO N°2: Control de centro de bandas, con solución Rojo Fenol Acido (1/5).

Longitud de onda teórica: (555 – 560) nm
Longitud de onda máxima:(560 ± 1) nm
Longitud de onda óptima: (560 ± 1) nm
Tabla N° 4: Control de linealidad fotométrica a 560nm, con diluciones de RojoFenol Acido.
Concentración (10-6g/mL) | Absorbancia (± 0,001) |
0,000 | 0,000 |
1,125 | 0,012 |
2,250 | 0,255 |
4,500 | 0,590 |
6,750 | 1,049 |
9,000 | 1,440 |

Grafico N°3: Control de linealidad fotométrica a 560nm, con diluciones de Rojo Fenol Acido

Datos del gráfico:
m ± Δm = (0,168 ± 0,010) mL/g
b ± Δb = (-0,104 ± 0,048)
Tabla N° 5: Control de veracidad a 560nm, con...