Extraccion Ribonucleoproteinas Por Salting Out

EXTRACCION DE ADN Y RIBONUCLEOPROTEINAS POR SALTING OUT

ADN (Ácido desoxirribonucleico)
El ADN (Ácido desoxirribonucleico) se puede definir como: Molécula que contiene la información genética que define a todo ser vivo y que es responsable de la transferencia de dicha información de generación en generación. Cada molécula de ADN está formada por dos cadenas de moléculas específicas queforman una doble hélice. Este ADN está compuesto de azúcares, fosfatos, y cuatro bases nucleótidas: adenina, guanina, citosina y timina (A, G, C, T). Las bases se unen en pares específicos. El ADN es la base de la herencia.


La Estructura Del ADN
Cada molécula de ADN está constituida por dos cadenas o bandas formadas por un elevado número de compuestos químicos llamados nucleótidos. Estas cadenasforman una especie de escalera retorcida que se llama doble hélice. Cada nucleótido está formado por tres unidades: una molécula de azúcar llamada desoxirribosa, un grupo fosfato y uno de cuatro posibles compuestos nitrogenados llamados bases: adenina (abreviada como A), guanina (G), timina (T) y citosina (C). La molécula de desoxirribosa ocupa el centro del nucleótido y está flanqueada por ungrupo fosfato a un lado y una base al otro. El grupo fosfato está a su vez unido a la desoxirribosa del nucleótido adyacente de la cadena, Estas subunidades enlazadas desoxirribosa-fosfato forman los lados de la escalera; las bases están enfrentadas por parejas, mirando hacia el interior y forman los travesaños. Los nucleótidos de cada una de las dos cadenas que forman el ADN establecen unaasociación específica con los correspondientes de la otra cadena. Debido a la afinidad química entre las bases, los nucleótidos que contienen adenina se acoplan siempre con los que contienen timina, y los que contienen citosina con los que contienen guanina. Las bases complementarias se unen entre sí por enlaces químicos débiles llamados puentes de hidrógeno.

ENZIMAS QUE DESTRUYEN AL ADN.
Como unmecanismo de defensa natural, las células contienen enzimas que destruyen al ADN (ADNasas). Estas enzimas deben ser inactivadas para garantizar la calidad de las preparaciones de ADN. La inhibición puede realizarse mediante métodos físicos, tales como desnaturalización por calor (a temperaturas de 65 C) o con métodos químicos. Estos últimos incluyen tratamiento con solventes orgánicos (fenol ycloroformo), con antioxidantes (Ditiothreitol y β-mercaptoetanol), con agentes quelantes (EDTA, EGTA) que capturan los iones magnesio necesarios para la funcionalidad de las ADNasas, o con agentes caotrópicos que actúan removiendo el agua estructural de las proteínas (Rogers y Bendich1988). Por lo general se utilizan mezclas de varios de estos reactivos para asegurar la inhibición de tales enzimas.EXTRACCIÓN DE CONTAMINANTES.
El objetivo de extraer ADN es obtener preparaciones enriquecidas en esta molécula. Sin embargo, el ADN está asociado con proteínas (histonas) e inmerso EN un medio que contiene estructuras de composición química diversa. Además, los reactivos empleados en los procesos iniciales de purificación se convierten en agentes contaminantes. Las metodologías para retirar loscontaminantes de una preparación de ADN incluyen: la centrifugación a altas velocidades, la electroforesis, la separación a través de columnas e incluso la utilización de imanes (biomagnética) para obtener preparaciones de alta pureza. Un contaminante generalmente presente en preparaciones de ADN es el ARN (ácido ribonucléico). Esta molécula se degrada por incubación con la enzima ARNasa.
Lapurificación del ADN es importante porque permite:


EXTRACCION DE ADN
El aislamiento de la molécula de ADN se realizó por primera vez en 1869, a partir de núcleos aislados de linfocitos humanos y se denominó "nucleina".
En 1985, Mullis reunió algunas de las metodologías desarrolladas durante varios años, para realizar síntesis de ADN in vitro en forma exponencial, denominando este método...