Extraccion y cuantificacion de glucogeno (practica)

Ingeniería En Bioquímica; Bioquímica; Practica # 6; 2010; P. “Extracción y cuantificación de glucógeno en organismos marinos o hígado”

Instituto Tecnológico de la Paz.
Laboratorio de Bioquímica.

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04 de noviembre del 2010
En esta practica se busco identificar unidades de glucógeno en diversas especiesmarinas, como el calamar, o en el hígado de algunos mamíferos, picando la muestra utilizada lo mas posible, calentando la muestra en una solución con una base fuerte, se acidulo la solución y se le agrego alcohol para evitar que se hidrolizara el glucógeno, por ultimo se filtro el precipitado producido y se realizo una prueba de Lugol para determinar la presencia de glucógeno cuyo resultado seriacomparado con una prueba realizada a una solución de glucógeno al 1%.
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Introducción
El glucógeno es un polisacárido de reserva energética formado por cadenas ramificadas de glucosa, soluble en agua, una forma de obtener polisacáridos de los tejidos de diversos organismos es mediante el uso de una base fuerte que se encargaría de destruir lostejidos sin afectar los polisacáridos, los cuales si serian hidrolizados mediante el uso de un acido fuerte que llevaría al glucógeno hasta sus unidades de glucosa pero si se adiciona etanol se protegería el glucógeno pues precipita polisacáridos y elimina los monosacáridos solubles como la glucosa.
Metodología
Se inicia la practica picando una muestra pesada con anterioridad de tejido de unorganismo marino o hígado de algun animal superior y al terminar de picar se deposito en un matraz Erlenmeyer de 250 ml y se agregaron 50 ml de KOH al 3 N para que después se calentara en baño maria durante 30 minutos y ya que transcurrió ese tiempo se acidulo la solución agregándole el H2SO4 necesario y rápidamente para evitar la hidrolizacion de los polisacáridos se paso la muestra a un vaso deprecipitado y se le adiciono alcohol a 96° (etanol) y se dejo reposar la solución para que se formara el precipitado y se depositara al fondo del vaso para después filtrar el precipitado y pesar lo que se obtuvo por ultimo se procedió a secar el filtrado y se volvió a pesar para saber el rendimiento total y se procedió a añadir lo obtenido en un tubo de ensayo con agua destillada y se le realizo laprueba del yodo a 2 ml de la solucion y a los resultados obtenidos fueron comparados con los resultados de una muestra de 2 ml de glucógeno al 1%.

Resultados
La muestra que se utilizo peso 20.13 g, después del fltrado se obtuvieron 9.3017 g de precipitado, conforme a los resultados de la prueba de Lugol realizada a la muestra, se obtuvo un color café claro que indica que fue negativa y en lasolución de glucógeno se obtuvo un color muy oscuro, cercano al negro, indicando que la prueba fue positiva. El cuadro comparativo de todas las muestras utilizadas por los equipos esta expresado en la siguiente tabla.
Equipo | Muestra | Glucógeno 1% | Glucógeno extraído |
1 | Hígado de pollo | × | × |
2 | Almeja | × | × |
3 | Hígado de pollo | * | × |
4 | calamar | * | × |
5 |Langosta | * | × |
6 | Hígado de pollo | * | × |
7 | Abulón | × | × |
8 | Camarón | * | × |

Discusión
Con el procedimiento utilizado se obtuvo el glucógeno mediante la destrucción del tejido donde se encontraban, protegiendo el polisacárido con etanol formando los precipitados observados, las dos pruebas debieron dar positivas en ambas muestras, en la que se obtuvo debió dehaber dado un color mas claro, pero dio negativo en la prueba, esto puede deberse que al acidificar la muestra se dejo reposar un tiempo la muestra pues el acido que se estaba utilizando se agoto, otra razón por la que le dio negativo a la mayoria de los equipos puede ser explicada porque cuando un organismo vive, deben de pasar menos de 24 horas para que la prueba sea optima pero la mayoría de los...