extraccion y cuantificacion de proteinas

Informe de Laboratorio N°1
Tema: Extracción y Cuantificación de proteínas Fecha: 31/03/2014
Nombre: Cruz Alessandra Cristina.
Objetivos:
Extraer las proteínas de una muestra de tejido animal.Determinar el contenido de proteínas totales en muestras de origen animal.
Adquirir habilidad en la realización de una curva de calibración.

1-Introduccion

En la mayoría de trabajos bioquímicoses bueno cuantificar la proteína total de un extracto proteico después de los distintos pasos de extracción, purificación, etc., con el fin de poder saber los rendimientos de estos procesos y si éstoshan sido adecuados o no. Existen varios métodos de cuantificación de proteínas, pero los más usados son aquellos en los que un colorante se une, de forma inespecífica, a las proteínas, dando alextracto una coloración característica y cuantificable en un espectrofotómetro. El espectrofotómetro tiene diferentes características en cuanto a sensibilidad y linealidad de respuesta, pero el másutilizado de todos ellos es la cuantificación con el reactivo de Bradford (1976), que se basa en la reacción del azul Comassie con las proteínas y posterior medida de la absorbancia desarrollada a 595 nm.Para determinar la concentración de proteína es necesario disponer de una curva patrón en la que se mide la A 595 nm de unas soluciones cuya cantidad de proteína se conoce y después se interpolarán enla curva patrón los valores de absorbancia obtenidos en las muestras cuya concentración de proteína se pretende determinar.

2- Experimentos y resultados

Materiales:
Colorante Azul Brillante deCoomassie G-250, 0,2 % en etanol 95%.
Etanol 95%.
Solución Estándar: Albúmina de suero Bovino 1 mg/mL.
NaOH 1N.
Material biológico: muestra de carne vacuna.
Tubos de ensayo, gradilla, pipetas,varilla de vidrio, papel de filtro.
Espectrofotómetro, centrifuga, balanza.

Procedimiento experimental:
A) Extracción de proteínas:
Pesar 100mg de tejido animal.
Agregar 0,5 ml de NaOH 1N;...