Extracción De Adn Forense

METODOLOGIA
EXTRACCION DE ADN
* ORGANICA (FENOL-CLOROFORMO)

Esta técnica implica la adición de varios químicos, el primero en incorporarse es el SDS (dodecilsulfato de sodio) paraposteriormente agregar la proteinasa K, estos componentes son utilizados para romper las paredes de la célula y crear el rompimiento de las proteínas que protegen a la molécula de ADN, el SDS rompe losenlaces no covalentes en las proteínas provocando una desnaturalización perdiendo su conformación, y la proteinasa K facilita la purificación de los ácidos nucleicos degradando las proteínas contaminantes,también inactiva enzimas como ADNasas y ARNasas en muestras biológicas protegiendo así los ensayos, mejorando el trabajo en PCR[1]. La mezcla de Fenol/Cloroformo es adicionada para separar lasproteínas del ADN, al centrifugar la muestra las proteínas y los restos no deseados de la pared celular son separados quedando lejos de la fase acuosa y las moléculas de ADN quedan suspendidas para suposterior análisis.

* CHELEX

CHELEX es un compuesto de copolímeros de estireno de divinilbenceno conteniendo iones apareados de iminodiacetato que actúan como grupos quelantes en unión de ionesmetálicos como el Mg (magnesio). Para remover el magnesio de la reacción, enzimas son activadas y las moléculas de ADN quedan protegidas; en los protocolos de extracción de ADN en muestras biológicasse les adiciona una solución de Chelex al 5% y colocadas en ebullición por varios minutos para romper las células y liberar el ADN. Al inicio de la técnica se realizan lavados con agua mili-Q pararemover los contaminantes. La exposición a una temperatura de 100° C hace una desnaturalización en la molécula de ADN asi como una interrupción de las membranas celulares y la destrucción de proteínascelulares, después se hace un rápido spin en el vortex y/o en la nano-centrífuga la resina y los restos celulares son empujados hacia el fondo del tubo, el sobrenadante es removido y puede ser...