Extracción De Adn

UNIVERSIDAD CIENTIFICA DEL SUR

FACULTAD de: MEDICINA HUMANA

LABORATORIO DE BIOLOGÍA CELULAR Y MOLECULAR

CURSO: BIOLOGÍA CELULAR Y MOLECULAR
PROFESOR:

INFORME DE PRÁCTICAS
PRACTICA N°: 7
TITULO: Extracción de ADN usando enzimas de restricción

INTEGRANTES:


HORARIO de PRÁCTICAS
DÍA: JUEVESHORA: 16:10 - 18:00

FECHA de REALIZACIÓN de la PRÁCTICA: 9 de JUNIO
FECHA de ENTREGA: 23 de JUNIO

LIMA – PERÚ

INTRODUCCIÓN
El ADN es un ácido nucléico presente en todos los seres vivos y tiene la función de codificar todo lo que nosotros somos, se encuentra formado por dos cadenas de desoxirribonucleótidos que se ubican una frente a la otra de forma antiparalela, estascadenas se mantienen unidas gracias a puentes de hidrógeno entre sus bases, en la cual hay dos puentes de hidrógeno entre la Adenina y Timina, y tres puentes de hidrógeno entre la Guanina y Citosina. El ADN fue identificado por primera vez por el biólogo suizo Friedrich Miescher en 1868, observadas de los núcleos de las células del pus contenidas en vendajes quirúrgicos que habían sido desechados,llamando así a la sustancia “nucleína”, pero este descubrimiento no obtuvo el reconocimiento que debía sino hasta 1943, cuando el científico Oswald Avery realiza el mismo descubrimiento. Las cadenas del ADN poseen una torsión tridimensional, que le da la conformación de doble hélice a la molécula, ésta estructura fue propuesta en el año 1953 por los científicos Watson y Crick, que utilizaronestudiaron cristales de ADN mediante una técnica de difracción de rayos X.
Para el desarrollo de la clonación de secuencias de ADN para así poder estudiar mutaciones encontradas en diversas patologías humanas, y realizar un mapeo y secuenciación de los genes con fines terapéuticos, se necesita de una metodología muy utilizada en la biología celular y molecular, la extracción de ADN, lo cual se puederealizar mediante la utilización de enzimas de restricción.
OBJETIVOS:
* Extraer ADN a partir de muestras biológicas
* Descubrir las funciones de las enzimas de restricción
* Conocer como las enzimas de restricción cortan el ADN
* Observar el ADN cortado con diferentes enzimas de restricción como EcoRI y Alul
* Realizar una comparación entre dos técnicas de aislamiento deDNA
MARCO TEORICO:

Enzimas de restricción:
Las enzimas de restricción son, como su nombre lo dice, enzimas que se encargan de cortar los enlaces fosfodiester que se encuentran en el material genético a partir de una secuencia que éstas reconocen. Éstas son extraídas de organismo procariotas, es decir, de bacterias, en donde degradan el material genético de organismo extraños que ingresen en lacélula, ya que actúa como mecanismo de defensa, metilando su ADN para así poder distinguir entre el ADN propio y extraño. Las enzimas de restricción no son capaces de cortar el ADN metilado, es por ello que solo pueden afectar al ADN extranjero mas no el bacterial.
Se conocen 3 tipos de enzimas de restricción:
* Tipo I y Tipo III:
Estos tipos cumplen la actividad de cortar, es decirrestringir, y de modificar, por un lado, los del tipo I cortan lejos de la secuencia de reconocimiento mientras que los del tipo III cortan de entre 5 a 8 bases antes o después de la secuencia previamente reconocida. Para poder moverse en el interior de la molécula de ADN requieren de ATP desde la zona de reconocimiento hasta la del corte.

* Tipo II:
Las enzimas de restricción del tipo II solocumplen una actividad de restricción, es decir, de cortar. Al reconocer una secuencia la corta de manera predecible y constante, cortan de manera muy precisa. Éstas requieren como cofactor al Mg2+ y no requieren de aporte de ATP.
Las enzimas de restricción son muy utilizadas en la extracción de ADN, sus aplicaciones son el realizar un mapa de restricción de un bacteriófago, la fragmentación de ADN...