Extracción de DNA
Páginas: 27 (6544 palabras)
Publicado: 27 de septiembre de 2015
EXTRACCIÓN, CUANTIFICACIÓN Y VISUALIZACIÓN DE ADN BACTERIANO Y FÚNGICO
Axl Stivel Giraldo Cepeda1, Erika Del Pilar Palacios Barahona1, Wilson Prada Varón1Paola Fernanda Ruiz Aparicio1.
1Universidad Nacional de Colombia, sede Bogotá.
RESUMEN
La extracción, detección y análisis subsecuente o cuantificación de ácidos nucléicos es un paso indispensable en muchas aplicaciones comúnmente usadaspor los investigadores en ciencias biológicas. Para este propósito diversas técnicas de extracción y separación son ampliamente aplicadas, dependiendo las características propias del material biológico. Durante el desarrollo de esta práctica se llevaron a cabo cuatro diferentes procedimientos basados en el uso de compuestos orgánicos, para extraer DNA genómico y plasmídico de la cepa bacterianaE.coli DH5α, así como DNA genómico fúngico de Xylaria sp, y del esporocarpo de un hongo basidiomicete. La detección del material genético se determinó mediante separación electroforética y su respectiva cuantificación se llevó a cabo mediante espectrofotometría.
Palabras Clave: Extracción DNA, Electroforesis, E.coli DH5α, Xylaria sp.
INTRODUCCIÓN
El método para la extracción eficiente de ADN apartir de la diversidad de microbios es un punto de gran relevancia en cualquier laboratorio de microbiología o biología molecular. Uno de los problemas centrales al que se enfrentan los microbiólogos utilizando PCR para estudiar la ocurrencia microbiana o la genética microbiana es determinar el más eficiente (en términos de velocidad y sensibilidad) método para aislar pequeñas cantidades de ADNa partir de un número limitado de células. Esto es de particular preocupación cuando se intenta con técnicas de lisis de uso común para la mayoría de especies de microorganismos extraer el ADN de los tipos de células que poseen paredes celulares rígidas y resistentes.
El análisis de ADN de hongos es importantes para comprender diversos procesos como función y estructura de sus comunidades, lacaracterización e identificación taxonómica, así como el entendimiento de características enzimáticas, que pueden cumplir importantes funciones en la biodegradación de compuestos producto de los procesos industriales y agrícolas (Sadati, 2015). Para el análisis de ADN las técnicas de extracción, cuantificación y pruebas de purezas cumple un papel importante en este tipo de investigación. Unaextracción óptima de ADN fúngico es aquella que es relativamente rápida, fácil y de bajo costo, además genera una calidad y cantidad de ADN adecuados para otros ensayos moleculares (Plaza, 2004). Debido a las características morfológicas de los hongos, como paredes celulares extremadamente fuertes, con polisacáridos y compuestos polifenólicos, que son difíciles de eliminar y que pueden inhibirreacciones importantes para la extracción, los métodos convencionales para la extracción de ADN fúngico se basan en la disrupción mecánica de micelios utilizando amoladoras (con o sin nitrógeno líquido) para reducir la plasticidad de la pared celular, y requieren bromuro de cetiltrimetilamonio (CTAB) y fenol-cloroformo para eliminar los anteriormente mencionados polisacáridos y compuestos polifenólicos(Kikuchi, 2009).
El objetivo de la presente práctica consistió en aislar con éxito el DNA genómico y plasmídico de la cepa bacteriana E.coli DH5α mediante el uso secuencial de diferentes solventes orgánicos, de igual forma se buscó extraer el DNA fúngico de la cepa en cultivo Xylaria sp. que se ha demostrado presenta actividad celulolítica, además de muestras completas de basidiocarpos de unhongo perteneciente al género basidiomycetes, a continuación se detectó y separó el material, para finalmente obtener mediante lecturas de absorbancia la pureza del DNA extraído.
METODOLOGIA
Reactivos y suministros.
Los reactivos fueron suministrados por el laboratorio de técnicas moleculares de la Universidad Nacional. los reactivos son los mencionados en el procedimiento de extracción de ADN...
Axl Stivel Giraldo Cepeda1, Erika Del Pilar Palacios Barahona1, Wilson Prada Varón1Paola Fernanda Ruiz Aparicio1.
1Universidad Nacional de Colombia, sede Bogotá.
RESUMEN
La extracción, detección y análisis subsecuente o cuantificación de ácidos nucléicos es un paso indispensable en muchas aplicaciones comúnmente usadaspor los investigadores en ciencias biológicas. Para este propósito diversas técnicas de extracción y separación son ampliamente aplicadas, dependiendo las características propias del material biológico. Durante el desarrollo de esta práctica se llevaron a cabo cuatro diferentes procedimientos basados en el uso de compuestos orgánicos, para extraer DNA genómico y plasmídico de la cepa bacterianaE.coli DH5α, así como DNA genómico fúngico de Xylaria sp, y del esporocarpo de un hongo basidiomicete. La detección del material genético se determinó mediante separación electroforética y su respectiva cuantificación se llevó a cabo mediante espectrofotometría.
Palabras Clave: Extracción DNA, Electroforesis, E.coli DH5α, Xylaria sp.
INTRODUCCIÓN
El método para la extracción eficiente de ADN apartir de la diversidad de microbios es un punto de gran relevancia en cualquier laboratorio de microbiología o biología molecular. Uno de los problemas centrales al que se enfrentan los microbiólogos utilizando PCR para estudiar la ocurrencia microbiana o la genética microbiana es determinar el más eficiente (en términos de velocidad y sensibilidad) método para aislar pequeñas cantidades de ADNa partir de un número limitado de células. Esto es de particular preocupación cuando se intenta con técnicas de lisis de uso común para la mayoría de especies de microorganismos extraer el ADN de los tipos de células que poseen paredes celulares rígidas y resistentes.
El análisis de ADN de hongos es importantes para comprender diversos procesos como función y estructura de sus comunidades, lacaracterización e identificación taxonómica, así como el entendimiento de características enzimáticas, que pueden cumplir importantes funciones en la biodegradación de compuestos producto de los procesos industriales y agrícolas (Sadati, 2015). Para el análisis de ADN las técnicas de extracción, cuantificación y pruebas de purezas cumple un papel importante en este tipo de investigación. Unaextracción óptima de ADN fúngico es aquella que es relativamente rápida, fácil y de bajo costo, además genera una calidad y cantidad de ADN adecuados para otros ensayos moleculares (Plaza, 2004). Debido a las características morfológicas de los hongos, como paredes celulares extremadamente fuertes, con polisacáridos y compuestos polifenólicos, que son difíciles de eliminar y que pueden inhibirreacciones importantes para la extracción, los métodos convencionales para la extracción de ADN fúngico se basan en la disrupción mecánica de micelios utilizando amoladoras (con o sin nitrógeno líquido) para reducir la plasticidad de la pared celular, y requieren bromuro de cetiltrimetilamonio (CTAB) y fenol-cloroformo para eliminar los anteriormente mencionados polisacáridos y compuestos polifenólicos(Kikuchi, 2009).
El objetivo de la presente práctica consistió en aislar con éxito el DNA genómico y plasmídico de la cepa bacteriana E.coli DH5α mediante el uso secuencial de diferentes solventes orgánicos, de igual forma se buscó extraer el DNA fúngico de la cepa en cultivo Xylaria sp. que se ha demostrado presenta actividad celulolítica, además de muestras completas de basidiocarpos de unhongo perteneciente al género basidiomycetes, a continuación se detectó y separó el material, para finalmente obtener mediante lecturas de absorbancia la pureza del DNA extraído.
METODOLOGIA
Reactivos y suministros.
Los reactivos fueron suministrados por el laboratorio de técnicas moleculares de la Universidad Nacional. los reactivos son los mencionados en el procedimiento de extracción de ADN...
Leer documento completo
Regístrate para leer el documento completo.