Extracto Fúngico Extracelular

UNIVERSIDAD POLITÉCNICA DE PUEBLA

PROGRAMA ACADÉMICO INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA

BIOTECNOLOGÍA MÉDICA Y BIOELECTRÓNICA

ESTUDIO DE LA ACTIVIDAD BACTERICIDA Y/O BACTERIOSTÁTICO DE EXTRACTO FÚNGICO EXTRACELULAR DE FUSARIUM SPP. SOBRE PATÓGENO HUMANO

Presentado por:
García Pineda Alma Rosa
Guadarrama Valencia Lidia
Hernández Teyssier Eva Luz
Rodríguez Hernández Angélica
VelázquezValtierra José Pablo
Xochipa Morante Reyna Concepción

Mtra. María Gabriela Alvarado Castillo

29 de julio de 2012

ÍNDICE GENERAL
Índice de figuras III
Índice de tablas IV
OBJETIVO 1
Objetivo general 1
Objetivos Específicos 1
MARCO TEÓRICO 1
Antibiótico 1
Hábitat, taxonomía y características del microorganismo productor 2
Condiciones, nutrientes y medios de cultivo parainducir la propagación 4
Condiciones, nutrientes y medios de cultivo adecuados para inducir la producción del metabolito 4
Hábitat, taxonomía y características del microorganismo de prueba 5
Condiciones, nutrientes y medios de cultivo para propagar el microorganismo de prueba 6
Pruebas bioquímicas para la identificación de Staphylococcus aureus 7
Condiciones, nutrientes y medios de cultivopara preservación del microorganismo de prueba y microorganismo productor 8
Pruebas de antagonismo y antibiograma 9
METODOLOGÍA 11
Obtención, cultivo y aislamiento de la cepa productora del metabolito 11
Prueba de morfología colonial para la identificación de la cepa productora 11
Prueba de microcultivo 11
Resguardo de la cepa productora de metabolito 11
Obtención y cultivo de lacepa de prueba 12
Prueba de antagonismo 12
Producción e inducción del metabolito en medio líquido 12
Separación y/o purificación del metabolito 13
Determinación de actividad bactericida y bacteriostática 13
Actividad bacteriostática, concentración mínima inhibitoria (MIC) 13
Actividad bactericida, concentración mínima bactericida (MBC) 14
Extracción de DNA 14
Electroforesis deextracción de DNA 14
Preparación de gel de agarosa 14
Preparación de las muestras 15
PCR con primers ITS1 e ITS4 15
Corte del fragmento producto de PCR por enzimas de restricción EcoRI y PstI 16
Electroforesis de producto de PCR y de restricción 16
Preparación de gel de agarosa 16
Preparación de las muestras 17
RESULTADOS Y DISCUSIÓN 18
Obtención, cultivo y aislamiento de la cepaproductora del metabolito 18
Prueba de morfología colonial para la identificación de la cepa productora 19
Prueba de microcultivo 19
Prueba de antagonismo 20
Producción e inducción del metabolito en medio líquido 22
Separación y/o purificación del metabolito 23
Determinación de actividad bactericida y bacteriostática 25
Actividad bacteriostática, Concentración Mínima Inhibitoria (MIC) 25Actividad bactericida, concentración mínima bactericida (MBC) 26
Electroforesis de extracción de ADN 28
Electroferesis de productos de PCR y Restricción 28
Resultados esperados para restricción 30
Fusarium oxysporum 30
Fusarium chlamydosporum 31
Fusarium graminearum 31
Comparación de resultados de electroforesis productos de restricción con los resultados esperados realizados conla bioinformática 32
CONCLUSIONES 32
BIBLIOGRAFÍA 34
CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES 36

Índice de figuras
Figura 1. . Principales estructuras de Fusarium. 2
Figura 2. Efecto del pH y la temperatura sobre el crecimiento de Fusarium. 3
Figura 3. Staphylococcus aureus en medio de cultivo sal manitol, se muestra el manito positivo (izquierda)ya que vira a color amarillo, y manitol mediopositivo (derecha). 8
Figura 4. Microflitración con acrodiscos de 0.45 µm marca TITAN2. 13
Figura 5. Siembra de explantes de sistema radical de planta en agar PDA. 18
Figura 6. Cinética de crecimiento de Fusarium en medio PDA. 19
Figura 7. Cinética de crecimiento de Fusarium en medio selectivo. 19
Figura 8. Se observan macroconidios típicos de Fusarium teñidos con azul de algodón, observada...