Extractos Biológicos

Jiménez Camacho Karina Elizabeth
Instituto Tecnológico de La Paz
Técnicas básicas experimentales
Lunes 2 de Marzo de 2015
RESUMEN
Para una adecuada extracción de moléculas biológicas de interés de tejidos animales o vegetales y de
microorganismos, es necesario acceder a las células y desintegrarlas. El método de elección para esto
depende de las características físicas y químicas del tejido ycaracterísticas estructurales de las células,
así como de la localización de la molécula de interés. Suelen utilizarse métodos químicos como
detergentes y solventes orgánicos, métodos físicos como el shock osmótico, y métodos mecánicos
como la disrupción celular con mortero o con pistilo y perlas de vidrio. Estos dos últimos son los más
tradicionales y fueron llevados a cabo, donde el resultado de laextracción proteica se cuantificó
mediante el método de Bradford, obteniéndose una concentración de 153.83 μg/mL tras la ruptura
celular con pistilo y perlas de vidrio, casi el doble de la resultante tras la disrupción con mortero que fue
de 86.71 μg/mL, en la dilución más concentrada de la muestra (1:100). Con base en esto, es posible
determinar que la disrupción celular con perlas y pistilo devidrio es más eficiente debido al
aplastamiento del tejido con el pistilo y por tanto el movimiento generado de las perlas de vidrio que
crean fuerzas de colisión y de corte.
Palabras clave: extracción, moléculas biológicas, métodos mecánicos, disrupción celular, mortero,
pistilo y perlas de vidrio, método de Bradford.

INTRODUCCIÓN
Para una adecuada preparación de una muestra
y una eficienteextracción de moléculas
biológicas de tejidos animales o vegetales y de
microorganismos, el primer paso es tenerlas en
solución, para lo cual es necesario acceder a las
células del tejido y desintegrarlas para liberar las
moléculas de interés, iniciando con la rotura de
la pared celular, de la membrana plasmática, o
de ambas (1).
El métodoclave:
de elección para este procedimiento
Palabras
depende delas características físicas y
químicas
del
tejido
y
características
estructurales de las células, así como de la
localización de la molécula de interés en la
célula (2).

El método más simple y suave para hacerlo es
la lisis osmótica, la cual consiste en suspender
las células en solución hipotónica donde la
concentración de solutos es menor que la que
se encuentra al interior de las células en suestado fisiológico normal. Bajo la influencia de
las fuerzas osmóticas, el agua se difunde hacia
el interior de la célula, provocando que la
membrana no resista la presión y la célula se
hinche y estalle (2).
Los detergentes y solventes orgánicos también
son efectivos para lisar células siendo capaces
de romper la membrana celular, pero deben
utilizarse con cuidado ya que pueden llegar a
degradarla molécula de interés (2).
Muchas células requieren algún proceso de
ruptura mecánica para que liberen su contenido

intracelular. Algunos de estos métodos incluye
el uso de un pistilo, que disgrega la muestra
mediante fricción con la pared del tubo que
contiene la muestra al agregar algún material
abrasivo como vidrio pulverizado o perlas de
vidrio. El proceso se puede realizar
manualmente, conpistilos de vidrio o de
plástico, o con ayuda de dispositivos
electrónicos,
conocidos
como
homogenizadores, el cual aplasta el tejido entre
un pistón y las paredes del tubo que lo contiene
o un sonicador que rompe las células al
someterlas a vibraciones ultrasónicas (2, 3). El
uso de pistilos u homogeneizadores se
recomienda en general para muestras pequeñas
y tejidos blandos, aunque también seusa para
tejidos no fibrosos como hojas jóvenes o flores.
El uso de mortero también es un método
convencional de rompimiento por fricción, donde
el tejido contenido en un volumen de buffer se
mezcla y macera hasta obtener un extracto
soluble y homogéneo (3).
Al efectuar esta ruptura celular, la proteína o
molécula de interés queda expuesta a agentes
que pueden dañarla. La integridad de muchas...