Extreccion De Adn

MEDICINA TROPICAL ¨PEDRO KOURͨ
Comparación entre 5 métodos para la extracción de ADN
de triatomíneos: su utilización en la técnica de ADN
polimórfico amplificado al azar
Lic. Jorge Fraga Nodarse,1 Lic. Jinnay Rodríguez,2 Lic. Omar Fuentes,3 Lic. Mayda Castex4 y Lic. Aymé Fernández-
-Calienes5
RESUMEN
Se evaluó la aplicabilidad de 5 protocolos útiles para la extracción del ADN genómico deTriatomíneos, y se describió el método
del acetato de potasio modificado, como un método con el que se obtiene un alto rendimiento y pureza del ADN en el menor
tiempo y costo, para su utilización como molde en la técnica de ADN polimórfico amplificado al azar (RAPD [la cual es un
método simple para detectar el polimorfismo genético del ADN]) y probablemente en otras técnicas moleculares basadasen la
amplificación por la reacción en cadena de la polimerasa. La calidad del ADN constituye un elemento crucial para esta técnica,
la cual necesita un método de extracción de ADN lo más estandarizado posible con el que se obtenga un ADN puro, no degradado,
libre de ARN y de inhibidores de la reacción en cadena de la polimerasa: porque cambios en la pureza afectan los perfiles deamplificación y esto se manifiesta en la presencia de bandas falsas y en la poca reproducibilidad del ensayo.
Palabras clave: RAPD, extracción de ADN, Triatomíneos.
Los triatomíneos desempeñan un papel
importante en la transmisión de la enfermedad de
Chagas. En Cuba existe el riego de la enfermedad
vectorial al encontrarse en la isla 4 especies de
triatomíneos: Triatoma flavida (Neiva, 1911),
Triatomabruneri (Usinger, 1944), Bolbodera
scabrosa (Valdés, 1990) y Triatoma rubrofasciata
(De Geer, 1973). La especie T. flavida es
considerada una especie selvática que
presumiblemente es atraída a las casas por la luz;
de las especies encontradas en Cuba es la más
abundante, y posee características que aumentan
su peligrosidad como vector potencial.1
El análisis de las variaciones genéticas delas
poblaciones de triatomíneos utilizando métodos
moleculares constituye un elemento esencial en
estudios taxonómicos, biosistemáticos, epidemiológicos,
de genética poblacional y de evolución.
2,3 La técnica del ADN polimórfico
amplificado al azar (RAPD) representa un ensayo
para el estudio del polimorfismo genético del ADN.
Este consiste en la amplificación de segmentos de
ADN genómicomediante la tecnología de la
reacción en cadena de la polimerasa (RCP),
utilizando como cebadores oligonucleótidos cortos
diseñados al azar.4 El RAPD requiere de cantidades
muy pequeñas de ADN y no es necesario el
clonaje, la secuenciación o la hibridización, lo que
constituye una ventaja sobre otras técnicas
moleculares usadas en la caracterización genómica.
1 Licenciado en Bioquímica.Aspirante a Investigador.
2 Licenciada en Biología. Aspirante a Investigadora.
3 Licenciado en Biología. Investigador Auxiliar.
4 Licenciada en Biología. Investigadora Agregada.
5 Licenciada en Bioquímica. Investigadora Agregada.
REV CUBANA MED TROP 2004;56(3):208-13
209
Sin embargo diferentes estudios han demostrado
que varios factores afectan los perfiles obtenidos,
manifestándose en lapresencia de bandas falsas y
la poca reproducibilidad del ensayo.5,6
Uno de los factores que afectan los patrones
del RAPD es la calidad del ADN en la reacción.7
En este trabajo se reportó el uso de un método
rápido de extracción de ADN genómico, con
elevada pureza y rendimiento, que facilita la
caracterización genética y molecular de
poblaciones de triatomíneos en Cuba utilizando latécnica del RAPD.
MÉTODOS
Se utilizaron en el estudio 10 ejemplares de
T. flavida colectados en la cueva Caimanera,
Península de Guanahacabibes, Pinar del Río, Cuba.
A los 10 triatomas colectados se le aisló el ADN
genómico a partir de una pata, utilizando 5 métodos
de extracción diferentes.
Método de calentamiento: la pata fue
homogeneizada de forma manual en nitrógeno
líquido y 50 μL de...