Exudado faríngeo para sembrar cultivos

1. OBJETIVO

Identificar los microorganismos presentes en la muestra problema (exudado faríngeo).

2. FUNDAMENTO

El sistema respiratorio se divide en vías altas o superiores, que comprenden las áreas anteriores a la laringe, incluyendo la nasofaringe, orofaringe, laringe, epiglotis, oído externo y medio, y los senos paranásales, y vías bajas o inferiores que incluyen todas lasestructuras posteriores a la laringe.

El tracto respiratorio habitual (la faringe) está formado por distintos microorganismos entre los que destacan los siguientes grupos y especies: estreptococos, estafilococos, micrococos, neisserias, Moraxella catarrhalis, corinebacterias, Haemophilus spp, Porphyromonas, Prevotella, Fusobacterium, Veillonela, Peptostreptococcus, Actinomyces, etc. Sin embargo, cuandoencontramos una patología en la faringe, el agente etiológico más frecuentemente aislado es el Streptococcus pyogenes, pero también, otros microorganismos patógenos que podemos hallar son: Streptococcus pneumoniae, Streptococcus alfa-hemolítico grupo viridans, etc.

Para poder identificar el agente microbiano de la muestra problema, se procederá a la siembra del mismo en diferentes medios decultivo, y así observar si hay o no crecimiento en cada uno de ellos. Además se procederá a realizar diferentes pruebas, como la tinción de Gram, la catalasa….








3. MATERIALES UTILIZADOS

Hisopo/medio de transporte Stuart
Materiales para la realización de un medio de cultivo (matraz erlenmeyer, varilla…)
Materiales para realizar una tinción de Gram (portaobjetos, pipetaPasteur…)
Tira oxidasa
Peróxido de hidrógeno (catalas)
Microscopio
Autoclave
Campana de anaerobiosis
Guantes
Bata
. Papel de Filtro




4. PROCEDIMIENTO

Una vez obtenida la muestra, exudado faríngeo, se procederá a la identificación de los microorganismos que posiblemente estén presentes en la misma. Para ello se realizarán las pruebas que a continuación se describen:En primer lugar se escogerán los medios específicos para la muestra de exudado faríngeo:
- Estreptococos β-hemolíticos; Columbia ANC + 5% sangre de cordero – agar.
- Haemophilus; Chocolate Poly Vitex Bacitracina – Agar.
- Cándida albicans, levaduras; Sabouraud Gentamicina Cloranfenicol – agar.
- Pneumococos; Columbia ANC + 5% sangre de cordeno – agar.
- Staphylococcus aureus; Chapman –medio.

No se ha utilizado el medio Loeffler, puesto que en el laboratorio no se disponía de él; no obstante, es un medio específico para el microorganismo Corynebacterium diphteriae el cual es muy improbable que no se hallara en la muestra.
A continuación se procede a sembrar cada uno de los medios por la técnica de los cuatro cuadrantes, y así obtener un mejor aislamiento de las colonias.El primer día se incubaron todos los medios en aerobiosis, excepto el de agar sangre, que se incubó dentro de una campana de anaerobiosis. Para crear dicho ambiente de anaerobiosis, se introdujo en la campana un sobre que tiene como función quelar el oxígeno disponible, tanto en el espacio interno de la campana como en el de la placa. Para comprobar que estas condiciones anaeróbicas se han dado,se introdujo también dentro de la campana una tira, la cual en un principio es de color azul, y tras el periodo de incubación, si efectivamente se han dado dichas condiciones, esa coloración cambiará a transparente. La incubación tuvo una duración de 24 horas a 37⁰C.
El segundo día, todos los medios que anteriormente fueron incubados en aerobiosis, se incubaron en anaerobiosis como ya se explicóen el párrafo anterior. Además se sembró otra placa de agar sangre, pero esta vez se incubó en aerobiosis. Esta segunda incubación tuvo una duración de 24 horas a 37⁰C.

En segundo lugar, se realizó la visualización macroscópica a las placas en las que se produjo crecimiento bacteriano, éstas placas corresponden con las dos de agar sangre, una incubada en condiciones de aerobiosis y otra en...