FACTORES QUE AFECTAN LA ACTIVIDAD ENZIMATICA

FACTORES QUE AFECTAN LA ACTIVIDAD ENZIMATICA
1) MARCO TEORICO:
Para realizar los siguientes experimentos es necesario el conocimiento de los siguientes conceptos:

Enzima:
Pepsina:
Albúmina:
Km: concentración de sustrato necesario para que la velocidad de la reacción sea la mitad de la velocidad máxima.
Vm: es la velocidad máxima de la reacción

2) INTRODUCCION:
Las enzimas son compuestosencargados de catalizar las reacciones químicas que se llevan a cabo en nuestro organismo, reduciendo la energía de activación de estas reacciones.

Estas enzimas necesitan de ciertas condiciones para cumplir de forma óptima con sus funciones, es así que si su medio se modifica, su actividad enzimática también se verá alterada, en el siguiente experimento, demostraremos la acción sobre la actividadenzimática de los siguientes factores:

A. Concentración de Substrato [S]
B. Concentración de la Enzima [E]
C. pH del medio
D. Influencia de la temperatura
E. Tiempo de la reacción.
F. Efecto de inhibidores y activadores

3)OBJETIVOS:
Determinar el Km experimental de la pepsina para la albúmina mediante la ecuación de Michaelis-Menten y la ecuación de Lineweaver-Burk.
Demostrar que lavelocidad de una reacción enzimática es directamente proporcional a la concentracion de la enzima.
Determinar el Ph óptimo para la actividad de la pepsina.
Determinar la temperatura óptima para la actividad de la pepsina.
Observar cuanto varia el sustrato con respecto a la reaccion de la actividad enzimatica en el transcurso del tiempo.


4) INTRODUCCION A CADA EXPERIMENTO:
Se dividió las experienciasentre las mesas, siendo la mesa N°5 nos tocó la Experiencia 5. A continuación detallaré el procedimiento seguido en los experimentos.
EXPERIENCIA N°1: EFECTO DE LA CONCENTRACIÓN DEL SUSTRATO
-Se prepara la batería de tubos de ensayo (1-7) que contienen agua destilada, HCl 1N y albúmina. Mientras que el tubo 8 solo contiene pepsina. Viéndose en estos que la concentración del sustrato ira aumentando.Tubos Nº

1
2
3
4
5
6
7
8
ml agua destilada
8
7
6
5
4
3
2
-
ml HCl 1N
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
-
ml albúmina
1
2
3
4
5
6
7
-
ml pepsina
-
-
-
-
-
-
-
5

-Se lleva a leer al espectrofotómetro a los tubos del 1 al 7. Las absorbancias obtenidas serán consideradas la Lectura Inicial.
-Se incuba los 8 tubos a 37 °C por 5 minutos.
-Luego, se añade 0,5 ml de pepsinadel tubo 8 al primer tubo y se mezcla por inversión. Y se lleva a incubar a 37 °C. Tras un minuto se hace lo mismo con el segundo y así sucesivamente. El tiempo de reacción será de 5 minutos, pasados los cuales se llevarán inmediatamente los tubos al espectrofotómetro a 420 nm.
- Los resultados obtenidos serán considerados como Lectura Final. La resta de la Lectura Inicial y la Lectura Final darála Actividad Enzimática.
-Finalmente, con los resultados se harán las siguientes gráficas:
1) Actividad enzimática vs. [S]
2) 1/Actividad Enzimática vs. 1/ [S]
Y se calculará el Km de la pepsina en estas: Como se ve en los gráficos, la velocidad máxima sería 175, por lo que el Km sería 87,5.
.-Interpretación de resultados de la experiencia 1:
Se demuestra la acción del cambio de concentración enla actividad enzimática, podemos apreciar que a una mayor cantidad de sustrato habrá una mayor actividad enzimática, hasta un punto en el que la actividad se mantiene, formándose una “meseta”, esto debido a que se alcanzó la velocidad máxima de la reacción.


























EXPERIENCIA N°2: EFECTO DE LA CONCENTRACIÓN DE LA ENZIMA
-Se prepara los tubos de ensayo (1-6), que contienen aguadestilada, HCl 1N y albúmina (1-5) y uno que solo contiene pepsina (6). Se puede ver que la concentración de la enzima va aumentando.
Tubo Nº
1
2
3
4
5
6
ml agua destilada
4,5
4,0
3,5
3,0
2,5
-
ml HCl 1N
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
-
ml albúmina
5,0
5,0
5,0
5,0
5,0
-
ml pepsina
-
-
-
-
-
4,0

- Se preincuban a 37 °C por 5 minutos. Tras lo cual se lleva a leer el tubo...