factores que afectan las enzimas
OBJETIVOS:
Explorar el efecto de la temperatura, de la variación del pH del medio y de la presencia de cianuro, sobre la actividad de laperoxidasa.
GENERALIDADES:
Las enzimas suelen reconocerse como las unidades funcionales del metabolismo celular. Son proteínas globulares, especificas en cuanto al sustrato y a la reacción que catalizan,sensibles a las variaciones de temperatura y de pH y pueden activarse e inactivarse por agentes diversos.
La enzima objeto de examen se cataloga como oxido-reductasa se encuentra en cantidadabundante en hortalizas verdes (por ejemplo, espinaca y acelga) y cataliza loa reducción del peróxido de hidrogeno a expensas de un sustrato rico en electrones. Se denomina peroxidasa y atreves de sugrupo prostético (hemina) que contiene hierro, se combina con cianuro, lo que traduce en inhibición. La ecuación general puede presentarse así:
Donde AH es una molécula reducida y A corresponde alproducto de oxidación.
PROTOCOLO:
1. Detección de la actividad de la peroxidasa:
Es un mortero de porcelana, macere el tejido vegetal, empleando entre 5 y 10 ml de agua destilada. No deseche lostrozos en suspensión, ni filtre, tampoco intente medir el macerado con pipeta pues podría obstruirla.
En un tubo de ensayo, mezcle 1 ml de sustrato rico en electrones (guayacol 1%) 1 ml de peróxidode hidrogeno (2%) y añada, aproximadamente 1 ml del macerado que acaba de obtener. Agite y observe: la aparición inmediata de un color café rojizo le indicara que hubo reacción (el color se debe a laformación de quinonas).
Ambiente: color rojizo la reacción fue mas rápida que la de 37 °C.
2. Efecto de la temperatura:
Tome tres tubos de ensayo y, en cada uno coloqueaproximadamente 1 ml del macerado vegetal, mantenga u n tubo a temperatura ambiente y caliente los otros dos durante un minuto, el primero a 37 °C y el segundo a 100 °C efectué la reacción adicionando 1 ml de...
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