Factores que afectan un método espectrofotomético

Objetivo
* Seleccionar tubos de laboratorio para poder ser usados como cubetas para el espectrofotómetro.
* Manejar algunos de los parámetros que intervienen en el establecimiento de un método espectrofotométrico.
* Establecer las condiciones óptimas de los parámetros probados para la aplicación del método.
Introducción
Experimentalmente para el establecimiento de un métodoespectrofotométrico, después de optimizar las condiciones químicas del sistema (pH, temperatura, control de interferentes, concentración adecuada de reactivos, solvente apropiado, protección a la luz para evitar reacciones fotoquímicas, etc.) que garanticen que se tiene la especie de interés en condiciones adecuadas para la medida, se establecen los siguientes parámetros:

1-Longitud de ondaanalítica: Se escoge mediante el registro y/o la observación de la curva espectral o espectro de la sustancia que indicará si es adecuado tomar la longitud de onda de máxima absorción u otra banda característica de la sustancia como longitud de onda para realizar las medidas, la longitud de onda escogida se conoce como longitud de onda analítica.

2- Intervalo óptimo de concentraciones: Se debetrabajar, en lo posible, con concentraciones que permitan que se cumpla la ley de Beer, con el fin de obtener una curva de calibración que tenga una relación lineal.

Para obtener el intervalo óptimo de concentraciones primero se construye la curva de Ringbom, que consiste en construir una gráfica de absortancia (100- %T) vs. lg Concentración. Los datos se obtienen preparando una serie desoluciones patrón del analito, que cubran una variación de por lo menos dos órdenes de magnitud de concentración de este y se miden las transmitancias correspondientes a la longitud de onda analítica escogida. Para la mayoría de los sistemas la curva de Ringbom corresponde a una curva en forma de S. La parte lineal de esta gráfica permite obtener el intervalo de concentraciones óptimo o el intervalo quepresentara una relación lineal entre absorbancia y concentración. En esta gráfica, los cruces de la parte recta (la intermedia), con la parte baja y con la parte alta, pueden servir para determinar un valor para los límites de detección mínimo y máximo, respectivamente.

3- Curva de Calibración: Con los datos de la parte recta de la curva de Ringbom se construye la curva de calibraciónAbsorbancia ( en las ordenada ) vs. Concentración (en la abcisa) previo ajuste de los datos por mínimos cuadrados (que incluyen el punto 0.0, 0.0000) revisando que el coeficiente de correlación sea estadísticamente significativo. La gráfica de la recta de calibración debe incluir los puntos experimentales. La recta ajustada también se conoce con el nombre de curva de trabajo.

5- Sensibilidad del métodoanalítico: Se calcula la sensibilidad del método de la pendiente de la curva de calibración y se expresa como se indicó anteriormente.

Límite de detección: Se preparan, por lo menos, diez soluciones del blanco de procedimiento, se leen las transmitancias o absorbancia respectivas y se calcula como se indicó anteriormente.

Precisión del método. Carta de dispersión: La precisión indica ladispersión de las medidas o la variabilidad del método. La precisión se mide mediante un parámetro estadístico de dispersión, generalmente se utiliza la desviación estándar, S:
S = [å ( X- X promedio)2 /( n -1)] 1/2
donde X es la variable medida concentración, absorbancia, etc., X promedio el valor medio de la variable medida y n el número de medidas o datos. Un valor pequeño de desviaciónestándar con relación al valor medio, indica que las medidas presentan poca dispersión o que son precisas. En muchos casos, se observa si todos los datos de una serie de medidas caen entre el valor medio y más o menos dos desviaciones estándar, X promedio ± 2S, si es así, se dice que el método tiene una precisión del 95 %.

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