Factores que afectan un metodo espectrofotometrico

INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLOGICAS

LABORATORIO DE MÉTODOS DE ANALISIS

ESTUDIO DE ALGUNOS FACTORES QUE AFECTAN EL ESTABLECIMIENTO DE UN MÉTODO ESPECTROFOTOMÉTRICO


Grupo: 4IV1
Sección:2

Nombre de Los Profesores:
* Sandoval Martínez Dalila
* Rodríguez Paéz Lorena

Fecha de entrega: 28/02/2011

Calificación: _______________Objetivos:
* Seleccionar tubos de laboratorio para poder ser usados como cubetas para el espectrofotómetro.
* Manejar algunos de los parámetros que intervienen en el establecimiento de un método espectrofotométrico.
* Establecer las condiciones óptimas de los parámetros probados para la aplicación del método.
Introducción
La espectrometría es un método químico que se utiliza paracuantificar la concentración de analitos utilizando la luz. A los métodos que se auxilian con la luz para llevar a cabo un análisis cuantitativo se le conoce como métodos espectrofotométricos, estos pueden tener una sub-clasificación dependiendo de la longitud de onda que utilicen para el análisis entre los más conocidos están: espectrometría de absorción visible (colorimetría), ultravioleta einfrarrojo.
Para considerar a un método espectrofotométrico como cuantitativo primero debe de cumplir ciertas reglas como:
* El método seleccionado deber ser específico para cuantificar un analito de nuestro interés.
* Que el método esté libre de todas las interferencias posibles al momento de hacer la determinación o en su defecto tratar de controlar lo más posible estas interferencias.
*Debe de tener alta precisión y alta exactitud.
* El método debe tener una alta sensibilidad y además el límite de detección debe de corresponder a una concentración baja.
Al realizar los análisis por medio de un método espectrofotométrico se realizan dos medidas de la cantidad de luz absorbida. La primera medida se realiza para saber la cantidad de luz que está llegando al transductor, estamedida se realiza cuando se introduce la celda con lo que nosotros conocemos como blanco. Y a esta medida se le conoce como intensidad Po del blanco, es cuando la concentración del material analizado es cero.
La segunda medida se obtiene cuando nosotros comparamos las medidas de las muestras o los patrones de calibración con la medida del blanco y a esta media se le conoce como P. Para expresaresta relación que se tiene de estas 2 medidas podemos emplear 3 términos diferentes. El primer término se le conoce como transmitancia que es la simple relación de P/Po y se utiliza la letra T.
El segundo es el porcentaje de transmitancia que solamente se obtiene de multiplicar la transmitancia por 100 (%T= T x 100). Y por último tenemos al logaritmo negativo de T que es conocido como absorbancia(A) y la expresión logarítmica se expresa como (A= - log T).
Se tiene que la absorbancia de una muestra es proporcional a la concentración de la sustancia que absorbe la luz incidente. De la forma experimental se puede expresar que;
A= a b c
Ya traduciendo la ecuación anterior, se puede comprobar que la absorbancia es directamente proporcional a:
a) Una constante que es una propiedad de lasustancia por si misma así como de la longitud de onda de medida
b) La longitud de paso óptico a través del cual la luz viaja hacia la muestra
c) La concentración de la sustancia que absorbe la luz
En otras palabras la ecuación anterior describe a la ley de Lambert-Beer, esta ley es la base en la cual se fundamentan los métodos espectrofotométricos, ya que esta ley trata de relacionar laintensidad de luz incidente y de la luz transmitida cuando es incidida una longitud de onda en particular en un medio que absorbe.
La intensidad de luz siempre se puede medir pero a esta se le asocia un error de tipo aleatorio que se le conoce como error fotométrico, y la precisión que pudiera tener una medida obtenida por un método espectrofotométrico depende de este error. Sin embargo, hay una...