Fagos Traducido

Propiedades estructurales y biológicas de Mycoplasmavirus MVL3: una interacción inusual Virus-Procariote
La cinética de adsorción y crecimiento de Mycoplasma virus MVL3 en células huésped de Acholeplasma laidlawii 1305/68, han sido estudiadas con los experimentos de crecimiento en un solo paso, lisis prematura, y de estallido simple. Se encontró que el virus mata a las células infectadashuésped. La liberación del virus comienza 90 minutos después de la infección y continúa cerca de 10 a 15 horas. Por lo tanto, la producción del virus es diferente a los bacteriófagos líticos clásicos y en cambio se asemeja a los virus citocidas no líticos de animales. Los detalles estructurales del virus son descritos, y el peso molecular del DNA lineal viral se ha encontrado que es de 26.
Tresdiferentes tipos de Mycoplasma virus infectando a Acholeplasma laidlawii fueron originalmente aislado por Gourley (7,8 y 9). Éstos y los aislamientos posteriores forman tres grupos (revisados por Maniloff et al,.15): (i) el grupo 1 de los aislados, son viriones desnudos en forma de bala. El aislado, MVL2, se demostró que contiene una molécula circular de DNA monocatenario de 1.5Daltones. (17) (ii) Elgrupo 2 de los virus son, partículas esféricas envueltas. El MVL2 aislado, contiene una cadena doble de DNA en una súper hélice circular cerrada covalentemente, alrededor de 7.8x (13, 16) (iii) El único aislado del grupo 3 es MVL3. Este virus es una partícula poliédrica desnuda (alrededor de 60nm de diámetro) con una cola corta (alrededor de 25nm de largo) que contiene una hebra doble de DNA.Estudios de los ciclos infecciosos de los grupos 1 y 2 de los Mycoplasma virus (revisado por Maniloff et al., 15) han mostrado que ambos grupos son virus no citocidas: las células infectadas continúan creciendo mientras liberan la progenie de los virus. En un reporte preliminar sobre el ciclo de infección del MVL3, Liss, (13) notó que las células infectadas mueren.
Aquí reportamos los estudios sobreel ciclo infeccioso del MVL3 mostrando que, mientras las células infectadas ya no son más viables (es decir, ya no son capaces de formar colonias) la progenie del virus continua siendo liberada de éstas células durante varias horas. Este tipo de ciclo infeccioso se asemeja a los virus citocida de animales no líticos en lugar de los bacteriófagos líticos. También se presentan datos sobre laestructura del virion y del DNA viral.
MATERIALES Y MÉTODOS
Medios y Reguladores (solución amortiguadora). Caldo triptosa (contenido por litro: 20g de triptosa [Difco], 5 g de Tris, 5g de NaCl, 10g de glucosa y 10mL de suero fracción PPLO [Difco], y las placas de agar triptosa (contienen: agar al 1% [Difco] en caldo triptosa) fueron utilizados para cultivar células según lo descrito por Maniloff (14).Solución reguladora Tris-EDTA-NaCl (TES) (Tris-hidrocloruro 0.01 M, EDTA 0.001 M, NaCl 0.001 M [pH 8.0]) fue usada para lavar a las células y para el procedimiento de purificación del MVL3.
Células y virus. A. laidlawii 1305.K2 fue utilizada como célula huésped en todos los experimentos. Esta clona fue aislada de la cepa A. laidlawii M1305/68, que fue amablemente suministrada por Gourlay (9). Laclona 1305.K2 (referida como K2) fue seleccionada por su alta eficacia de plaqueo, con Mycoplasma virus MVL3 de un número al azar de clones M1305/68 aislados.
En todos los experimentos un cultivo de toda una noche de K2 (fase estacionaria) fue diluido 1:5 en un medio fresco e incubado por 4 horas a 37°C antes de que el virus fuera agregado.
El Mycoplasma virus MVL3 fue cultivado a partir de unamuestra del aislado original de Gourley y Wyld (10). Para preparar una solución madre de virus, 200mL de un cultivo de toda una noche de K2 fueron agregados a 800mL de caldo triptosa, y después de 2 horas de incubación a 37°C, MVL3 fue agregado en una multiplicidad de infección (MOI) de 1. El cultivo fue incubado a 37°C por 24 horas. La suspensión resultante fue precipitada por la adición de...