Falling inside the Black

Método de difusión en agar
Producción de los discos de papel
Se pesó el equivalente a 25 mg de la droga fluconazol (Pfizer
S. A., Argentina) pura (100% de potencia) y se disolvió en 10 ml
deagua destilada estéril. Cada disco de papel Whatman N° 1
(Whatman International Ltd., England) estéril, de 7,25 mm de
diámetro, se cargó con 10 ml de la solución (carga final por disco
25 mg). Una vezsecos, los discos se envasaron en tubos estériles,
de cierre hermético, con silica gel previamente deshidratada.
Los tubos se mantuvieron a 4 °C en desecador, y conservaron
su calidad durante dosaños.
Se efectuó el control de la calidad (uniformidad de la carga,
esterilidad y estabilidad) sobre el 10% de los discos producidos
por lote. La uniformidad y la estabilidad de carga del disco seevaluaron por el método de difusión en agar, como se describe
posteriormente en metodología, utilizando las cepas de referencia.
La esterilidad de los discos fue controlada antes y después
decargar la droga.
Procedimiento
A partir de un cultivo de 24 h a 35 °C en agar YM (30), se
preparó un inóculo de turbidez 0,5 McFarland en solución 0,15
M de cloruro de sodio estéril (solución salina0,85%).
Para el método de difusión se utilizaron placas de Petri de
10 cm de diámetro, con 25 ml de agar Mueller-Hinton (Difco),
suplementado con 2% de glucosa (Sigma) y con el agregado de
azul demetileno, en una concentración final de 0,5 mg/ml (medio
MHm) (2, 14).
La superficie de cada placa de Petri con MHm se hisopó en
tres direcciones con el inóculo correspondiente y se dejó secardurante 10 a 15 minutos en estufa, a 36 ± 2 °C. Se colocaron
dos discos de fluconazol por placa y luego de una incubación de
24 h (48 h para C. parapsilosis) a 36 ± 2 °C, se midió con una
regla eldiámetro de la zona de inhibición del crecimiento, en
mm. No se tomaron en cuenta las colonias de pequeño o mediano
tamaño dentro de la zona de inhibición.
Interpretación de resultados
Para...