Farmacopea europea 6ta edición - controles microbiológicos

2.6.1. ESTERILIDAD
El texto correspondiente a esta monografía dispone actualmente de su versión traducida al español. Dicha traducción está pendiente de validación en colaboración con la AEMPS (Agencia Española de Medicamentos y Productos Sanitarios).
El ensayo se aplica a las sustancias, preparaciones o artículos que, según la Farmacopea, deben ser estériles. Sin embargo, un resultadosatisfactorio sólo significa que no se ha encontrado ningún microorganismo contaminante en la muestra examinada en las condiciones del ensayo.
PRECAUCIONES FRENTE A LA CONTAMINACIÓN MICROBIANA
El ensayo de esterilidad se realiza en condiciones asépticas. Con el fin de alcanzar tales condiciones, el entorno del ensayo debe ser adaptado al modo de realización del ensayo de esterilidad. Las precaucionestomadas para evitar la contaminación no deben afectar a los microorganismos cuya presencia haya que poner de manifiesto en el ensayo. Las condiciones de trabajo en las que se realizan los ensayos se comprueban regularmente, mediante muestreo apropiado de la zona de trabajo y la realización de controles apropiados.
MEDIOS DE CULTIVO Y TEMPERATURAS DE INCUBACIÓN
Los medios para el ensayo se puedenpreparar como se describe a continuación, o se pueden utilizar medios comerciales equivalentes, siempre que satisfagan el ensayo de fertilidad.
Para el ensayo de esterilidad se han encontrado adecuados los siguientes medios de cultivo. El medio líquido de tioglicolato se destina principalmente al cultivo de bacterias anaerobias; sin embargo, también permite detectar bacterias aerobias. El mediocon hidrolizado de caseína y de soja es adecuado para el cultivo tanto de hongos como de bacterias aerobias.
Medio líquido de tioglicolato
L-Cistina 0,5 g
Agar-agar 0,75 g
Cloruro de sodio 2,5 g
Glucosa monohidratada/anhidra 5,5 g/5,0 g
Extracto de levadura (hidrosoluble) 5,0 g
Hidrolizado pancreático de caseína 15,0 g
Tioglicolato de sodio o 0,5 g
Acido tioglicólico 0,3 mL
Disolución deresazurina sódica (1 g/L de resazurina sódica), recientemente preparada 1,0 mL
Agua R 1000 mL
pH después de la esterilización 7,1 ± 0,2
Mezclar la L-cistina, el agar-agar, el cloruro de sodio, la glucosa, el extracto de levadura hidrosoluble y el hidrolizado pancreático de caseína con agua R y calentar hasta su disolución. Disolver el tioglicolato de sodio o el ácido tioglicólico en estadisolución y, si es necesario, añadir hidróxido de sodio 1 M de modo que, después de esterilización, la disolución tenga un pH de 7,1 ± 0,2. Si es necesaria una filtración, calentar de nuevo la disolución sin llegar a ebullición y filtrar en caliente por papel de filtro humedecido. Añadir la disolución de resazurina sódica, mezclar y transferir el medio a recipientes adecuados, cuya relación entresuperficie y profundidad del medio sea tal que como máximo la mitad superior del medio de cultivo experimente un cambio de color, indicativo de la captación de oxígeno al final del período de incubación. Esterilizar utilizando un proceso validado. Si el medio no se va a utilizar de forma inmediata, conservarlo a una temperatura entre 2 °C y 25 °C en envase estéril y hermético. Si más del tercio superiordel medio ha adquirido color rosa, puede ser regenerado una sola vez por calentamiento de los envases en un baño de agua o en una corriente de vapor de agua hasta que desaparezca el color rosa seguido de enfriamiento rápido, tomando precauciones para evitar la introducción de aire no estéril en el envase. No utilizar el medio de cultivo después del período de conservación validado.
El mediolíquido de tioglicolato debe incubarse a 30-35 °C.
Para los productos que contengan un conservante mercurial, a los que no es aplicable el método de filtración por membrana, puede usarse el medio líquido de tioglicolato incubado a 20-25 °C en lugar del medio de hidrolizado de caseína y de soja, siempre que haya sido validado como se describe en el ensayo de fertilidad.
En el caso que se prescriba...