fases analiticas en un analisis

Casos Clínicos:
1.- MUJER DE 55 AÑOS CON UN CUADRO DE ANEMIA
FASE PREANALITICA
Anamnesis
Paciente mujer de 55 años que concurre a la guardia del hospital por falta de aire (disnea). La paciente refiere que en los últimos meses notaba cierta falta de aire ante los esfuerzos, pero que dicha dificultad se intensificó en las últimas horas. Allí el médico de guardia la nota pálida tanto en pielcomo en las mucosas. No se observó megalias.
Solicita al Laboratorio realizar exámenes de: Biometría Hemática, Prueba de Coombs
En el laboratorio se procede a la toma de la muestra de sangre venosa de la paciente.
FASE ANALITICA
Después de haber obtenido la muestra, se procede a rotular los tubos de ensayo, y se procede a realizar el análisis siguiendo la siguiente técnica:
La extensiónse prepara repartiendo uniformemente una gota pequeña de sangre sobre un portaobjetos de manera que solo se deposite una capa de células. Después de teñirlas, las extensiones se sangre se utilizan para:
 Determinar las fracciones de número de los tipos de leucocitos.
 
Para detectar glóbulos rojos anormales

MATERIAL

Tubos de ensaye de 13X100Pipetas de 1 y 5 ml Pipeta de shally (0.02ml)Pipeta de Thoma para globulos rojos y blancos
Cámara de Neubauer


Tubo de Witrobe graduado Tubos capilares
Porta y cubreobjetos
Papel parafilm Cerillos Guantes Gasas Gradilla

Instrumentos.
Microscopio Agitador de pipetas Espectrofotómetro Centrifuga Lector de hematocrito
Reactivos.
Liquido de Türk Etanol al 70%Liquido de Hayem Reactivo de Drabkin Solución estantard decianometahemoglobulina

DESARROLLO:
A). Hemoglobina

1. En un tubo de ensaye agregue 4 ml de cianometahemoglobina y0.02 ml de sangre, agitar cuidadosamente. Reposar 10 minutos y leer la absorbancia o el % de transmitancia contra el blanco reactivo.

B). cuenta de eritrocitos.
1. Llenar con sangre bien mezclada, la pipeta de Thoma hasta lamarca 0.52.

Limpiar cuidadosamente la parte externa de lapipeta, completar con el líquido de Hayem, hasta la marca de 101.

3. Sellar con papel parafilm, agitar durante 3 minutos, mezclar perfectamente.
4. Colocar el cubrehematimetro sobre la cámara.
5. Descartar las primeras 4-5 gotas de la pipeta y llenar la cámara por capilaridad por uno de los bordes del cubrehematimetro sobre la cámara.
6. Dejar reposar de 3-5 minutos., con el objetivo de 40xse cuentan los eritrocitos contenidos en los 80 cuadros pequeños.

C). Microhematocrito.
1. Se llena con sangre proveniente del tubo de la muestra, las 2/3partes de dos tubos capilares.
2. El extremo vacio de cierra con la flama o plastilina.
3. Colocar en los canales de centrifuga, con el extremo cerrado dirigido hacia fuera, centrifugar a 12000 rpm por 5 minutos.

D). Leucocitos.
1.Homogenizar la sangre, con la pipeta de toma para glóbulos blancos, aspirar sangre hasta la marca de 0.5, secar cuidadosamente la parte superior de la pipeta.
2. Completar con líquido de Türk hasta la marca 11, agitar 2 minutos.
3. Desechar las primeras 4-5 gotas y se carga la cámara de Neubauer.
4. Dejar reposar la cámara con la muestra durante 3 minutos. Observar al microscopio con el objetivode 10x.
5. Se cuentan los leucocitos en cada uno de los cuadrados de 1 mm 2 de las esquinas de la cámara.

E). Frotis sanguíneo.
1.Se coloca un agita de sangre anticoagulada en uno de los extremos de un p ortaobjetos, se sujeta colocando pulgar e índice en extremos opuestos, con un segundo portaobjetos se toca la gota de sangre y por capilaridad difunde, en un ángulo de 30° se desliza rápida yfirmemente en la dirección opuesta. (modisaos, 2014)

ROCEDIMIENTO COOMBS
I- PRUEBA ANTIGLOBULINA INDIRECTA (en solución salina de fuerza iónica normal)
1) En un tubo de hemólisis colocar 2 gotas del suero a probar.
2) Agregar 1 gota de suspensión de glóbulos rojos a pro-
bar al 3%, lavados 3 veces y resuspendidos en PBS.
El gotero provisto dispensa un volumen de 50±5 ul. Es
importante...