Fenol-ácido sulfúrico, carbohidratos totales,

LABORATORIO 3
DETERMINACIÓN DE HIDRATOS DE CARBONO TOTALES

OBJETIVOS

Cuantificar hidratos de carbono totales por el método del fenol-ácido sulfúrico

IDEAS PREVIAS

El método del fenol-ácidosulfúrico es un método colorimétrico simple y rápido para determinar los carbohidratos totales en una muestra. El método detecta, virtualmente, todas las clases de hidratos de carbono, incluyendo losmonosacáridos, los disacáridos, los oligosacáridos y los polisacáridos. Aunque el método detecta prácticamente todos los carbohidratos, la absortividad de los diferentes hidratos de carbono varía. Porconsiguiente, a menos que se conozca que una muestra sólo contiene un tipo de carbohidrato, se deben expresar los resultados, arbitrariamente, en términos de un hidrato de carbono dado.

En el presentemétodo, el ácido sulfúrico concentrado degrada cualesquiera polisacáridos,oligosacáridos y disacáridos a monosacáridos. Las pentosas (compuestos de 5 carbonos) son seguidamente deshidratadas para darfurfural y las hexosas (compuestos de 6 carbonos) a hidroximetilfurfural. A continuación, estos compuestos reaccionan con el fenol produciendo una coloración amarillo-dorada. Para los productos con uncontenido muy alto en xilosa (una pentosa), tales como el salvado de trigo o el salvado de maíz, debería utilizarse la xilosa para elaborar la curva de calibrado para el ensayo y medirse la absorción a480 nm. Para los productos con un contenido alto en azúcares de la familia de las hexosas, se utiliza habitualmente la glucosa para construir la curva de calibrado y la absorción se mide a 490 nm. Lacoloración desarrollada en esta reacción es estable durante varias horas y, bajo las condiciones adecuadas, la exactitud del método queda dentro de un ± 2%.

REACTIVOS

Disolución patrón de glucosa, de100 mg/L.
Fenol, al 5% m/m en H2O
Ácido sulfúrico, concentrado.

PROCEDIMIENTO

Disolución de la muestra.
Se pesar con exactitud ≈ 0.5 g de muestra seca molida. La muestra se homogeniza con 25 mL...