Fermentación
Páginas: 3 (677 palabras)
Publicado: 10 de octubre de 2013
El Sistema de dos híbridos o técnica del doble híbrido en levadura es una técnica de biología molecular usada para detectar interacción entre dos proteínas. A menudo se denota por Y2H (del inglésYeast Two Hybrid). 1
La técnica consiste en la activación de un gen reportero o más por la acción de un factor de transcripción sobre la secuencia regulatoria "UAS" (en inglés, Upstream activatingsequence) localizada upstream del promotor.
El principio de la técnica es el siguiente, el factor de transcripción es separado en dos fragmentos, uno que reconoce UAS y el otro que promueve la activaciónde la maquinaria de transcripción. Cada fragmento es fusionado a una de las proteínas cuya interacción se desea analizar, usando técnicas de ingeniería genética. Si las proteínas forman un complejoentre sí, los dos fragmentos del factor de transcripción se encontrarán y el gen reportero será transcrito.
Esquema de la técnica del doble híbrido.
Historia[editar · editar código]
Aplicadapor primera vez por Stanley Fields y Song en 1989, esta técnica fue diseñada originalmente para detectar interacciones proteína-proteína usando el activador transcripcional GAL4 de la levaduraSaccharomyces cerevisiae. La transcripción activada por GAL4 daba lugar a una proteína implicada en la utilización de galactosa, lo que constituía la base para la selección.2 Desde entonces, el mismo principiose ha ido adaptando para dar lugar a otros métodos alternativos, incluyendo algunos capaces de detectar interacciones ADN-proteína y ADN-ADN. Asimismo, se usa también en la actualidad Escherichiacoli en lugar de levadura.3
Principios de la técnica[editar · editar código]
La técnica del doble híbrido se basa en el hecho de que la mayoría de factores de transcripción eucarióticos tiene unaorganización modular; poseen un dominio de activación y otro de interacción, que pueden funcionar si se encuentran próximos el uno al otro, pero sin necesidad de estar unidos directamente.4 Esto quiere...
La técnica consiste en la activación de un gen reportero o más por la acción de un factor de transcripción sobre la secuencia regulatoria "UAS" (en inglés, Upstream activatingsequence) localizada upstream del promotor.
El principio de la técnica es el siguiente, el factor de transcripción es separado en dos fragmentos, uno que reconoce UAS y el otro que promueve la activaciónde la maquinaria de transcripción. Cada fragmento es fusionado a una de las proteínas cuya interacción se desea analizar, usando técnicas de ingeniería genética. Si las proteínas forman un complejoentre sí, los dos fragmentos del factor de transcripción se encontrarán y el gen reportero será transcrito.
Esquema de la técnica del doble híbrido.
Historia[editar · editar código]
Aplicadapor primera vez por Stanley Fields y Song en 1989, esta técnica fue diseñada originalmente para detectar interacciones proteína-proteína usando el activador transcripcional GAL4 de la levaduraSaccharomyces cerevisiae. La transcripción activada por GAL4 daba lugar a una proteína implicada en la utilización de galactosa, lo que constituía la base para la selección.2 Desde entonces, el mismo principiose ha ido adaptando para dar lugar a otros métodos alternativos, incluyendo algunos capaces de detectar interacciones ADN-proteína y ADN-ADN. Asimismo, se usa también en la actualidad Escherichiacoli en lugar de levadura.3
Principios de la técnica[editar · editar código]
La técnica del doble híbrido se basa en el hecho de que la mayoría de factores de transcripción eucarióticos tiene unaorganización modular; poseen un dominio de activación y otro de interacción, que pueden funcionar si se encuentran próximos el uno al otro, pero sin necesidad de estar unidos directamente.4 Esto quiere...
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