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Preparación de medios de cultivo sólidos y líquidos
Práctica numero 3
Objeto de aprendizaje
Aplicar los métodos de cultivo
Competencias:
Identificar el medio de cultivo
Preparar el medio de cultivo
Sembrar un microorganismo e incubar para ver si existe crecimiento
Identificar las características de las colonias formadas

Fundamentos:
Un medio de cultivo consta de un gel o unasolución que cuenta con los nutrientes necesarios para permitir, en condiciones favorables de pH y temperatura, el crecimiento de virus, microorganismos, células, tejidos vegetales o incluso pequeñas plantas. Según lo que se quiera hacer crecer, el medio requerirá unas u otras condiciones. Generalmente se presentan desecados en forma de polvo fino o granular antes de ser preparados; ya preparadospueden encontrarse en estado sólido, semisólido o líquido. El objetivo último del cultivo es variado: antibiograma, identificación, multiplicación…
Los virus, por ejemplo, son obligados parásitos intracelulares, por lo que necesitan un medio que contenga células vivas.
Los medios de cultivo pueden clasificarse según diferentes criterios, pero los más importantes son aquellos que se basan en:
a)Su consistencia
b) Su utilización
c) Su composición
d) Su origen
1) Medios líquidos: Son los que se presentan en este estado, denominándose por esta razón caldos. El medio líquido más utilizado es el llamado caldo nutritivo, compuesto principalmente de extracto de carne, peptona y agua. Se utiliza fundamentalmente cuando se pretende la obtención de una suspensión bacteriana de una determinadaconcentración.
2) Medios sólidos: Se preparan a partir de los medios líquidos, agregándoles un agente gelificante. Los más utilizados son la gelatina y el agar. Gelatina: Es una proteína animal obtenida de los huesos. Tiene el inconveniente de que es hidrolizada por muchas bacterias, y además su uso está muy limitado porque su punto de fusión es bajo (licúa a temperatura ambiente) razón por laque no puede utilizarse para cultivos a 37ºC, que es la tempera óptima de crecimiento para muchos microorganismos. Agar-agar: es un polímero de azúcares obtenido de algas marinas. Se trata de una molécula insoluble enagua pero soluble en agua caliente; una solución al 1,5% p/v forma un gel firme entre 32 y 39° C y no se funde por debajo de 85° C. Funde a 90ºC y solidifica una vez fundido alrededorde los 45ºC. Tiene el inconveniente de que introduce compuestos orgánicos indefinidos que pueden falsear los resultados de las necesidades nutritivas de un microorganismo. Aunque el agar es una mezcla de polisacáridos, Araki, en 1937, los dividió en dos grupos:- agarosa, con poco sulfato, libre de ácido pirúvico, y- agaropectina, con mucho sulfato y gran cantidad de cenizas. La proporción deagarosa a agaropectina en el agar varía según el alga de origen. El agar puede utilizarse para diferentes fines, aunque los más importantes son: agar comercial para la industria alimenticia, agar bacteriológico, agares purificados y agarosa, utilizada para electroforesis en gel. Aproximadamente la mitad de todo el agar que se produce, se utiliza en trabajo microbiológico, por lo que es importante laausencia de metales tóxicos.





Materiales, equipos e instrumentos
Tubos de ensaye
Polvos de los medios del cultivo (Mcconkey, Medio selectivo, Kligler, Medio diferencial)
Placas de Petri esterilizadas
Balanza granataría
Incubadora o baño maría
1 gradilla
1 asa de siembra
Mechero de bunsen
3 matraz Erlenmeyer
2 pipetas de 5 a 10 ml
Autoclave u olla de presión
CerillosParrilla o estufa
Probeta
Guanteletes de trapo


Procedimiento
Tinción de Gram -
1. Se realiza una extensión de cultivo en un portaobjetos y se deja secar. Se hace una fijación por calor.
2. Se cubre la preparación con un Violeta de genciana o cristal violeta (actúa como primer colorante)
3. Se lava con agua y se cubre con lugol que actúa como mordiente. Se lava con agua.
4. Se...