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Resultado practica 5
Extracción de ADN plasmídico (electroforesis en gel)


DISCUSIONES

Los plásmidos son moléculas circulares de DNA extracromosómico que se replican de forma autónoma, apartir de su propio origen de replicación. La información genética que portan los plásmidos no es generalmente vital para la supervivencia celular. No obstante, dicha información puede resultarimprescindible en determinadas circunstancias ambientales, e.g. plásmidos portadores de genes de resistencia a antibióticos.
Existen diversos métodos para la extraccion de plasmidos. Las técnicas deMinipreps o mini preparaciones de plasmidos, permiten la recuperación de plasmidos de DNA circular sobre el DNA cromosomal. El tratamiento de las células con una base de pH alto o un detergente interrumpe elapareamiento de las bases nitrogenadas, ocasionando que el DNA cromosomal se desnaturalice y se separe. Por el contrario la configuración superenrrollada del plasmido se mantiene estable.
En estapráctica utilizamos el método de lisis alcalina mayormente utilizado para la extraccion de plasmidos circulares proveniente de células bacterianas por su simplicidad, bajo coste y reproducibilidad.En este método explotamos las diferencias en las propiedades de desnaturalización y renaturalización entre el DNA plasmídico (pequeños círculos de DNA cerrados covalentemente) y el DNA cromosómico(fragmentado).
Al añadir la solución isotónica (EDTA, Glucosa y Tris) se estabilizamos el pH entre 7y 8 y se evita la degradación del ADN ya que atrapa los iones de magnesio presentes evitando laacción de ciertas enzimas.
La alcalinización con NaOH en presencia de un detergente fuertemente aniónico (SDS), provoco la lisis celular, la desnaturalización del DNA cromosómico y de las proteínas, yla liberación de los plásmidos. Los plásmidos se ven menos afectados por su pequeño tamaño y estructura superenrollada. La neutralización del medio en presencia de una concentración alta de sal...