filtracion en gel

Filtración en Gel en la Práctica
Separación por tamaño molecular

La cromatografia de filtración en gel separa moléculas de acuerdo a diferencias en tamaño a medida que éstas pasan a través de unmedio de filtración en gel empacado en una columna. A diferencia de las cromatografías de intercambio iónico o de afinidad, las moléculas no se unen al medio cromatográfico y tampoco el bufferempleado y su composición no influyen en el proceso de separación de dichas moléculas. Esta propiedad de la cromatografía de filtración en gel permite emplear condiciones de pH requeridas para posterioresseparaciones, así como también se puede emplear sales o cofactores sin que afecten la separación.

La cromatografía de filtración en gel es apropiada para separar biomoléculas sensibles a cambios depH, concentración de iones metálicos o cofactores, así como también a condiciones agresivas o drásticas. Las separaciones pueden ser realizadas en presencia de iones metálicos esenciales o cofactores,detergentes, urea, guanidina, ya sea en presencia de altas o bajas concentraciones de sales, así como también se puede realizar a temperatura ambiente o bien en un cuarto frío de acuerdo a losrequerimientos del experimento. Si la biomolécula es sensible a las altas temperaturas, entonces se puede emplear refrigeración. Las proteínas colectadas pueden ser almacenadas en cualquier tipo de buffer.Separación por Filtración en Gel
Para llevar a cabo una separación, un material de filtración en gel es empacado en una columna. Este material es una matriz porosa en forma de partículas esféricasque han sido seleccionadas por su estabilidad química y física, además de que debe ser inerte, es decir, no debe reaccionar con las moléculas a separar ni presentar características de adsorción. Lamatriz empacada en la columna es equilibrada con buffer que llena los poros y los espacios entre las partículas. El líquido dentro de los poros algunas veces se le denomina fase estacionaria,...