Filtración Sobre Membrana

FILTRACIÓN SOBRE MEMBRANA


Materiales:

▪ Matraces kitasato
▪ Bomba de vacío
▪ Sistema de filtrado
▪ Filtro de membrana
▪ Placas Petri
▪ Mechero Bunsen
▪Pinzas metálicas
▪ Muestra diluida (hamburguesa 3g/50ml)


Preparación de la muestra:

Hemos cogido 1 ml de la muestra ya diluida de hamburguesa, y hemos añadido 99 ml de SSF estéril.Utilizaremos 50 ml para la filtración sobre membrana.


Procedimiento:

1. Desenvolver las piezas del sistema de filtrado en el entorno de la llama del mechero Bunsen para que éstas conserven suesterilidad.
2. Entre el embudo y la plataforma de vidrio colocamos el filtro de membrana con la ayuda de unas pinzas estériles. Debemos tener cuidado de que quede perfectamente ajustado y sinburbujas. En caso de que se formen podemos introducir el filtro en un recipiente con agua estéril y así éste quedará mejor ajustado.

[pic]


3. Introducimos la muestra por el embudo yponemos en marcha la bomba de vacío para que comience el filtrado.
4. Cuando finalice el filtrado, quitamos las pinzas de sujeción y retiramos el embudo. Cogemos el filtro con unas pinzasestériles y lo colocamos en una placa de Petri con PCA, teniendo cuidado de que no se formen burbujas.
5. Incubamos en la estufa a 37 ºC durante 24 horas.
6. Leemos el resultado.Resultados:

Al leer los resultados hemos contado 10 cuadrados del filtro y hemos contado 4 colonias por cuadro, lo que nos da un total de 400 UFC aproximadamente. Esta filtraciónhabría que repetirla volviendo a diluir la muestra, ya que no está dentro de los márgenes óptimos para el recuento (entre 20-100).



Recuento:

3 g hamburguesa ─── 50 ml
X─── 1 ml ( X= 0,06 g


0,03 g hamburguesa ─── 400 UFC
100 g hamburguesa ─── X ( X= 1.333.333 UFC


Número estimado: 1.333.333 UFC/100 g de...