Fisica 1

Ingeniería biotecnológica
Tarea – física
Segundo semestre


¿Qué datos se han utilizado para construir el termograma?
Se analizaron las diferencias en composición y actividad antitríptica de sueros de soja y suero de tofu en relación al comportamiento térmico de sus proteínas. El suero de soja fue obtenido a partir de harina de soja desgrasada y el suero de tofu es el residuo líquido industrialde la fabricación del tofu. Ambos sueros contienen carbohidratos como componentes mayoritarios, proteínas, nitrógeno no proteico y sales. El suero de tofu presentó valores de densidad, extracto seco y proteínas más bajos, y una actividad antitríptica tres veces inferior que el suero de soja. Ensayos por calorimetría diferencial de barrido de proteínas aisladas del suero de soja mostraron lasendotermas de la lectina y los factores antitrípticos de Kunitz y Bowman-Birk, mientras que las de suero de tofu sólo muestran este último factor. Las diferencias entre sueros pueden explicarse por los diferentes procesos de obtención.
¿Cómo han obtenido los datos para construir el termograma?
Extracción acuosa de harina de soja desgrasada, libre de solvente, no tratada térmicamente (Santista S.A.,Brasil) con una relación agua: harina de 10:1 (2 hs, temperatura ambiente) y ajuste periódico del pH a 8,0 (NaOH 2 N). Centrifugación de la mezcla a 10500 g por 15 min a 20°C (Beckman Coulter Avanti J-25, rotor JA-14) para eliminar la fracción insoluble. El extracto obtenido se llevó a pH 4,5 (HCl 2 N), se dejó 2 hs a 4ºC y se centrifugó a 10500 g por 20 min a 20°C para separar las globulinas dereserva (GR) del suero de soja (SS). El suero de tofu (ST) fue cedido por una industria local (Soyana S.H.). Ambos sueros fueron liofilizados (equipo HETO FD4) obteniendo las muestras de SSL y STL. Sobre los sueros se determinó el contenido total de carbohidratos empleando el método del fenol sulfúrico (Dubois et al., 1956) y el contenido total de material nitrogenado (proteína bruta) por Kjeldahl(Nx6,25). La determinación de proteína real se realizó por el método de Lowry et al. (1951) sobre los precipitados (sin azúcares libres) obtenidos con TCA al 12% p/v y lavados al menos 5 veces con solución TCA para reducir la interferencia de azúcares reductores. Para los sueros liofilizados la precipitación se realizó sobre muestras solubilizadas (relación agua: liofilizado, 10:1). La eliminaciónde azúcares libres se realizó lavando 5 veces el precipitado con solución acuosa al 12% de TCA, empleando en cada lavado la mitad del volumen inicial y centrifugando (10000 rpm, 15min, 20ºC) descartando el sobrenadante. El grado de glicosilación se estimó a partir de la cantidad de proteínas y glúcidos en estos precipitados. El porcentaje de extracto seco de los sueros líquidos se determinósecando en estufa (105°C; hasta peso constante) el suero previamente liofilizado. El contenido de minerales se determinó como cenizas por calcinación a 550ºC hasta cenizas blancas. La contenido de lípidos se determinó sobre suero liofilizado por extracción con mezcla de Folch (cloroformo: metanol 2: 1), centrifugación, evaporación del solvente y pesada del residuo graso. La actividad antitríptica sedeterminó según el método de González y Carrillo (1987), con leves modificaciones. En este ensayo se midió la disminución de la actividad de la tripsina sobre hemoglobina desnaturalizada, debido a la adición del suero de soja. La proteólisis se detiene por adición de ácido tricloroacético (TCA) y en el sobrenadante se determinan por Folin (A650) los péptidos solubles y los aminoácidos liberados porla proteólisis. Se realizó un ensayo control (100% actividad proteolítica) en ausencia deinhibidores y un ensayo en blanco (0% actividad) con adición de TCA a t=0. El % inhibición de la tripsina se calculó según las siguientes expresiones:
A control – A blanco = 100 % actividad
A muestra – A blanco = X % actividad 100 – X = % inhibición
El aislamiento de las proteínas a partir de los sueros...