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La tecnología del DNA recombinante produjo un cambio fundamental en la industria de la fermentación Uno de las herramientas fundamentales utilizadas son los llamados enzimas de restricción, que sonEnzimas que cortan las cadenas de ADN en determinadas secuencias (palindrómicas) específicas para cada tipo de enzimas, de forma que cuando se somete una molécula de ADN a la acción de estosenzimas, resulta fragmentada en trozos (tanto más numerosos cuanto más larga sea la molécula).
Las etapas en la producción de ADN recombinante son las siguientes:
1. Preparación de la secuencia del ADNpara su clonación
2. Es la parte esencial del proceso, ya que el ADN debe separarse y concentrarse.
3. Partimos de células con núcleo, que deben ser lisadas (rotas).
4. Las proteínas estructurales,enzimas, ARN y restos moleculares deben separarse del ADN.
5. El ADN obtenido se concentra y se fragmenta por acción de las enzimas de restricción.
6. Se aísla el ADN que se desea clonar.
2.Preparación de un vector de clonación
El vector es el portador de la secuencia de ADN que se desea clonar. Puede ser un plásmido o un virus como el fago ʎ.
Las etapas del proceso consisten en:
1. Cortarel vector con enzimas de restricción, las mismas enzimas que se utilizaron para cortar el ADN que se quiere insertar.
2. Unir el vector y el ADN que se va a clonar.
Una vez que el ADN ha sidointroducido en el vector se denomina ADN inserto, o simplemente, inserto.
3. Formación del ADN recombinante
En esta etapa se produce la unión covalente del vector y el ADN inserto mediante una ligasa. Asíse realiza el sellado de la llamada Mella, Muesca o Nick.
4. Introducción del ADN recombinante en la célula anfitriona
Para la clonación (replicación del ADN recombinante) se necesita la maquinariacelular. Por ello, hay que introducir el ADN recombinante en una célula anfitriona.
Los tipos de células anfitrionas son:
1. Células bacterianas: son las más utilizadas, ya que tienen una alta...