FISIOLOGIA DETERMINACION DEL VOLUMEN TOTAL SANGUINEO


INFORME Nº 1
TEMA: DETERMINACIÓN DEL VOLÚMEN TOTAL SANGUÍNEO, EN EL PERRO UTILIZANDO EL COLORANTE AZUL DE EVANS O T-1824
OBJETIVO:
Determinar el volumen plasmático y el volumen total sanguíneo utilizando un perro como animal experimental.
MATERIALES: Perro de 20 kg o mas, solución de azul de Evans al 0,1%, tubo de 5ml con anticoagulante y otro de 10ml sin anticoagulante, centrifuga ymicro centrífuga, jeringas estériles de 5 y 10ml, 7 tubos de 10 ml (para las 7 concentraciones con azul de Evans), espectrofotómetro, tubos de micro hematocrito.
DESARROLLO DEL TEMA:
Como sabemos, el mayor componente del cuerpo es el agua con un 60% y este se encuentra dividido en 3 compartimentos: liquido extracelular (20%), liquido intracelular (20%) y liquido transcelular que corresponde a laporción del total del agua corporal contenido dentro de los espacios epiteliales como el liquido ocular. El líquido extracelular a su vez se encuentra dividido en 2 compartimentos: liquido intersticial (15%) y plasma (5%). Para el cálculo del tamaño de cada compartimento de los líquidos, se utilizan varias sustancias, estas deben distribuirse fácilmente, no deben ser tóxicas, y no debe afectar a ladistribución del agua¹⁻³.
El volumen plasmático generalmente se ha medido con colorantes que se unen a las proteínas plasmáticas, como es el azul de evans o T-1824, también puede medirse mediante la inyección de albumina seriamente marcada con yodo radioactivo. Al conocer el volumen plasmático y el hematocrito es posible calcular el volumen sanguíneo total.
PROCEDIMIENTO:
a. Determinar el pesodel perro, primero pesamos al perro y el dueño juntos, luego al dueño solamente, y sacamos la diferencia que será el peso del perro. Entonces tenemos que el peso del perro traído para la práctica es 27 kg.
b. Tranquilizamos al animal para poder sacar las muestras, y de ser necesario le ponemos tranquilizante en la dosis correspondiente.
c. Sacamos una muestra de 10 ml de sangre aproximadamenteen el tubo que no tiene anticoagulante (tapa roja) y 2 ml en el tubo que tiene anticoagulante (tapa morada).
d. En la misma vena le inyectamos el colorante Azul de Evans (1ml de solución al 0.1% por cada 5 kg de peso). Para saber la cantidad que hay que inyectar al perro, hacemos una simple regla de tres tomando en cuenta el peso del animal. Así tenemos:

1ml 5kgX 27 kg = 5,4 ml corresponde a la concentración inicial

e. Transcurridos como mínimo 10 minutos, tomamos la segunda muestra de sangre de 8 ml aproximadamente.
f. Las muestras de sangre recolectadas en los tubos, antes y después de la inyección con azul de Evans se centrifugan a 2500 r.p.m. durante 15 o 20 minutos. Observamos que el suero del primer tubo estransparente y el del segundo esta teñido con el colorante.
g. La muestra del suero sin colorante sirve para ajustar el espectrofotómetro, a una transmitancia de 100%, ya que el suero se le considera un líquido totalmente transparente.
h. Sacamos una muestra del suero con colorante, y le ponemos en el espectrofotómetro para saber la cantidad de transmitancia que tiene, en este caso, el suero concolorante tiene una transmitancia del 45%. Con este valor se puede obtener la concentración final del colorante en el plasma, llevando este dato a la curva de calibración, extrapolando el valor de la transmitancia de la muestra del problema a la abscisa.
“La curva de calibración es una función matemática producida por la regresión de las respuestas del detector registradas durante la calibraciónde un instrumento. La función describe las respuestas del detector a lo largo de un rango de concentraciones y es utilizada para predecir la concentración de una muestra desconocida, basándose en la respuesta del detector”².
i. A continuación realizamos la curva de calibración para saber la concentración final del plasma, utilizamos 7 soluciones con diferentes concentraciones cada una.
La...