fluorescencia

DEPARTAMENTO DE QUÍMICA ANALÍTICA Y TECNOLOGÍA DE ALIMENTOS

FUNDAMENTOS DE ANÁLISIS INSTRUMENTAL. 3ª RELACIÓN DE PROBLEMAS.

1.- En ausencia de autoabsorción, la intensidad de fluorescencia de una muestra es proporcional a la
concentración, solo a concentraciones bajas. Calcular el porcentaje de error que se comete
suponiendo que la respuesta es lineal cuando se mide la intensidad relativade fluorescencia de
disoluciones 2.5x10-5 y 2.5x10-6 M de un compuesto cuya ε=4000 L mol-1 cm-1 si el valor de b es 1 cm.
-5

-6

Solución: c=2.5x10 M: 11.65 %; c=2.5x10 M; 0.88 %

2.- Se desea analizar vitamina B1 en un preparado comercial de 2.000 g por el método del tiocromo.
Se extrae con HCl y fosfatasa y se diluye a 100 mL. Se purifica una alícuota de 15 mL pasándola por
unacolumna cromatográfica, y por causas inherentes al proceso se diluye a 25 mL. De la anterior
solución, se forman dos porciones de 5 mL, una de ellas se trata con ferricianuro y ambas se aforan a
10 mL para examen fluorimétrico. Una solución de referencia de 0.2 ppm de tiamina se somete al
mismo tratamiento que la muestra problema, con excepción de que la porción introducida en la
columna conservasu volumen original. Se toman dos alícuotas de 5 mL y una se oxida y ambas se
aforan a 10 mL. Se mide la fluorescencia de ambas muestras dando lugar a intensidades de
fluorescencia de 18 y 13 unidades de fluorescencia, respectivamente. Calcular los ppm de vitamina B1
en la muestra.
Solución: 23 ppm

3.- La forma reducida del dinucleótido de nicotinamida y adenina (NADH) es una coenzimaimportante y muy fluorescente. Tiene un máximo de absorción de 340 nm y un máximo de emisión a
465 nm. Las soluciones patrón de esta sustancia generan las siguientes intensidades de fluorescencia:
Concentración de NADH
(µmol/L)
0.100
0.200
0.300
0.400
0.500
0.600
0.700
0.800

Intensidad relativa
2.24
4.52
6.63
9.01
10.94
13.71
15.49
17.91

a) Trazar la curva de calibración delNADH.
b) Determinar la pendiente y ordenada en el origen por mínimos cuadrados para la gráfica del
apartado anterior.
c) Calcule la desviación estándar de la pendiente y la que corresponde a la regresión de la curva.
d) Una solución desconocida tiene una fluorescencia relativa de 12.16. ¿Cuál será su concentración
en NADH? Calcular la desviación la desviación estándar relativa del resultadoobtenido, así como
la desviación estándar relativa del resultado obtenido considerando que el valor de 12.16 es la
media de tres medidas.
-4

Solución: b) Irel=22.35 cNADH + 3.6x10 ; c) sy/x=0.1747, sb=0.2696; d) c=0.544 µM , DER=1.86 %; DER (con
replicados)=1.2 %

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4.- En algunos métodos fluorimétricos, el amortiguamiento de lafluorescencia es proporcional a la
concentración de las especies deseadas, por ejemplo, el metal X puede suponerse que amortigua la
fluorescencia del ligando L. En una serie de medidas se obtuvieron los siguientes datos:
Solución

Señal fluorescente

L (M)

X (M)
Blanco

5.0x10-6
5.0x10-6
5.0x10-6
5.0x10-6
5.0x10-6
5.0x10-6
5.0x10-6

1.0x10 -6
2.0x10 -6
3.0x10 -6
4.0x10 -65.0x10 -6
6.0x10 -6

0.0
84.0
67.2
50.5
33.6
16.9
0.50
0.00

Encuentre: a) La relación molar del complejo formado entre X y L.
b) La concentración de X en una solución, la cual, cuando se trata en la misma forma, da
una lectura de 26.8 unidades.
-6

Solución: 3.42x10 M

5.- A cuatro alícuotas de 10,0 mL de una muestra de agua se adicionaron 0.00, 1.00, 2.00 y 3.00 mL
de unasolución estándar de NaF que contenía 10.0 ppb de F- tal y como se muestra resumido en la
tabla. Se adicionaron a cada una 5.00 mL exactos de una solución que contenía un exceso de
complejo de Al con el rojo de Alizarina R, un complejo fuertemente fluorescente, y las disoluciones se
diluyeron a 50.0 mL. La intensidad de de fluorescencia de las cuatro disoluciones y de un blanco
fueron las...