Formula Roja

Anexo 2.- Determinacion de Hematocrito, Hemoglobina y realización de frotis diferencial.
1.1.- Actual mente gracias a la tecnología se dispone de equipo automatizado capaz de realizar las biometrías hemáticas con varios parámetros, la utilización de este equipo se realizara si se cuenta con él.
1.2 En dado caso de que no se puede realizar por medio automatizado se procederá de manera manualsiendo el Hematocrito, Hemoglobina (considerando la cantidad de tiempo en la que toma realizar este examen y el hecho de que la hemoglobina calculada por la relación hematocrito-hemoglobina es inexacta si se presentan hematopatías se recomienda asarlo en un equipo automatizado), Conteo total de eritrocitos y Frotis de sangre periférica los que se aran de manera manual, las Constantes corpusculares(volumen corpuscular medio y Hemoglobina corpuscular media) se aran por medio de cálculos.

1.2.1.- Determinación del hematocrito
Es sencillo y exacto y es importante para determinar los índices eritrocitarios
Fundamento:
El hematocrito mide el porcentaje del volumen de sangre total pero ocupada solamente por los eritrocitos
Material (hematocrito)
Tubo capilar
Lancetas
Centrífuga
Sangrecapilar o venosa con anticoagulante
Procedimiento:
1.- Homogeneizar perfectamente la sangre haciendo girar el tubo
2.- Utilizando el tubo capilar Llenar 3 cuartas partes del tubo y tapar con plastilina.
3.-Centrífuga a 5 minutos a 3500 revoluciones por minuto.
4.- Leer en la línea de separación de la columna de glóbulos rojos sabiendo que cada raya tiene 1%
Valores de referencia:
H= 40-52 M=36-48, Los valores pueden variar de zona geográfica y raza.
1.2.2.- Hemoglobina:
DOSAJE DE HEMOGLOBINA
Principio
La sangre se diluye en líquido de Drabkin, el cual hemoliza los hematíes y convierte la hemoglobina en cianometahemoglobina (cianuro de hemiglobina). La solución que se produce se lee por medio de un espectrofotómetro o fotocolorímetro. Su grado de absorbancia es proporcional a lacantidad de hemoglobina que contenga la sangre.
Materiales y reactivos
Un colorímetro fotoeléctrico o un espectrofotómetro.
Pipetas:
Una pipeta para sangre (pipeta de Sahli) graduada hasta 0,02 mL, con tubo de goma y boquilla.
Una pipeta de vidrio graduada de 5 mL.
Tubos de ensayo.
Reactivo de Drabkin para dilución.
Este reactivo se puede adquirir en tabletas o polvos para disolver en 1litro de agua destilada. Si se dispone de una balanza analítica la preparación se puede hacer en el laboratorio. Esta solución se puede conservar durante un mes en un frasco de vidrio oscuro. Deséchese si se enturbia.
El líquido de Drabkin no debe enfriarse demasiado, pues puede causar una decoloración con reducción del ferrocianuro.
Referencia para cianometahemoglobina (estandarizada):
Estasolución se puede adquirir en el comercio o en un laboratorio de referencia.
En las soluciones de referencia comerciales casi siempre indica la concentración en miligramos por 100 mL (generalmente en mg%).
Se preparan diluciones con reactivo de Drabkin de tal manera que los patrones contengan concentraciones de 60 mg, 40 mg, 20 mg de CNHi.
Leer los tubos en absorbancia con filtro verde a 540 nm,llevando el fotómetro a cero con el reactivo de Drabkin.
Para calcular la concentración de hemoglobina en cada tubo, realizar el siguiente cálculo:
Hb en g/100 mL = (P x D)/1000
P = Concentración del patrón.
D = Dilución de la muestra de sangre, que es 251 veces.
Para una concentración de patrón de :
60 mg 15 g/100 mL
40 mg 10 g/100 mL
20 mg 5 g/100 mL
Luego graficar una curva patróncolocando en el eje de las ordenadas las lecturas en absorbancia y en la abscisa la concentración de hemoglobina en g/100 mL.
Calibración del colorímetro
Antes de usar el colorímetro para calcular la hemoglobina se debe elaborar una curva de calibración. Con esta curva se puede preparar un gráfico y un cuadro de valores de hemoglobina.
Procedimiento
1.-En un tubo de 13 x 100 colocar exactamente 5...