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 ENZIMAS
CINETICA DE MICHAELIS Y MENDEN
CUANTIFICACION DE Km Y VELOCIDAD MAXIMA DELA FOSFATASA ACIDA
1.-OBJETIVOS DE APRENDIZAJE
Al finalizar la práctica el estudiante estará capacitado para:
Explicar la importancia de la cuantificación de los parámetros cinéticos km y VmaxDeterminar la Km y Vmax de la fosfatasa acida una reacción que sigue la cinética de Michaelis y Menten , aplicando otros arreglos algebraicos como el de Lineweaver-Burk y Eadie-Hosfstie.
2.-INTRODUCCIONTEORICA
Los valores de km y Vmax, son constantes cinéticas que reflejan la acción de una enzima. Estos valores se obtienen por análisis de los datos cinéticos que se obtienen midiendo por separadolas velocidades iniciales a diferentes tiempos, generalmente cada minuto, con diferentes concentraciones de sustrato, pero con una misma cantidad de enzimas en cada tubo. Cuando cambian lascondiciones de reacción, cambian los valores de km y v max. Por tanto se debe medir la Vmax y el km de cada enzima.
3.-MATERIALES Y REACTIVOS
Tubos de ensayo
Gradillas, pipetas
Matracesaforados de 25 y 50 ml. Clase A
Cronometro
Espectrofotómetro
Reactivos:
Sustrato :fosfato de p-nitro fenilo
Enzima fosfatasa acida
4.-PARTE EXPERIMENTAL
FUNDAMENTO DE LA REACCION.-
Las fosfatasasson enzimas que se encuentran en la sangre circulante, se denomina también fosfomonoesterasas, incluyen dos tipos importantes la fosfatasa alcalina (EC3.1.3.1.), presente en el hígado y en los huesosy la fosfatasa acida (EC3.1.3.2) producida por el tejido prostático, por los eritrocitos y las plaquetas cataliza la hidrolisis.
La fosfatasa acida, tiene como sustrato al p-nitro fenil fosfato,la hidrolisis de este sustrato forma como producto el p-nitro fenol, el cual absorbe a 405 nm, lo que permite su cuantificación.
La reacción:
4.1.-PROCEDIMIENTO.-
CONDICIONES DE REACCION :...