fosfatasa alcalina practica 17

Práctica #17 Fosfatasa Alcalina

Objetivo:
Determinar la ALP por el método rx-monza.
Fundamento:
La ALP(fosfatasa alcalina) es una enzima hidrolasa responsable de eliminar grupos de fosfatosde moléculas como nucleótidos, proteínas alcaloides. El proceso de eliminar el grupo fosfato se denomina desfosforilacion se encuentra presente en casi todos los tejidos particularmente enhígado, hueso , placenta intestino y riñón.
Tanto el aumento, así como disminución tiene significado clínico. Se encuentra aumentado en obstrucciones hepáticas y en hepatotoxicidades pormedicamentos, hepatitis disminuida, creatinas y deficiencia de vitamina C.
Principio del método:
P-nitrofenilfosfato + H2O Fosfato + P-nitrofenol


Material:
Suero problemaMaterial de punción(Adaptador, agujas, torunda y torniquete)
Pipeta automática
Microlab
Centrifuga
Baño María o estufa bacteriológica

Reactivos
Agua destilada
Reactivo 1a Tampon: dietanolamina ycloruro de magnesio
Reactivo 1b Sustrato: P-nitrofenilfosfato
Técnica:
1. Encender el aparato 10 minutos antes
2. Escoger la página de Fosfatasa alcalina
3. Realizar punción venosa..
4.Incubar y centrifugar posteriormente la sangre en tubo sin anticoagulante.
5. Separar el suero.
6. Preparar reactivos de la siguiente manera: Restituir 2ml de rx1a en 1b
7. Colocar en un tubo 1000ulde agua destilada(solución blanco de agua)
8. Preparar la solución blanca colocando 1 ml de rx y 20ul de agua destilada
9. Preparar la solución problema mezclando 2ml de rx con 40ul desuero(SE HACE AL DOBLE)
10. Mezclar bien las soluciones e incubar a 20-25 C por 15 minutos o a 37 C por 5 minutos.
11. Leer blanco, estándar y muestra.
12. Interpretar resultados
Valores Normales:En 25◦C:
60-170 unidades/litro
En 30◦C:...