Fosfatasa

Análisis de resultados

Siguiendo el orden de la práctica, el primer aspecto a analizar son los diferentes resultados obtenidos durante la prueba de inhibición con los extractos de Frijol, Soya y Garbanzo. En todos los casos se pudo observar una inhibición efectiva de la actividad de la tripsina pues el numero de unidades de tripsina obtenidos para cada caso, fue inferior al numero de unidadesde tripsina cuando la reacción se llevo a cabo sin inhibidor. Esto significa que efectivamente cada extracto posee en un grado u otro inhibidor que logran unirse efectivamente a la enzima libre o al complejo enzima sustrato reduciendo la concentración “activa” de tripsina con la correspondiente disminución de la producción de paranitroanilina detectada. Sin embargo es importante señalar que elgrado de inhibición obtenido para cada extracto es notoriamente diferente. Esto puede ser consecuencia de dos factores principales: uno puede ser la concentración total de inhibidor presente en cada extracto, lo cual puede variar considerablemente entre cada especie de leguminosa y el otro es relativo a la afinidad que presenta casa inhibidor para inhibir la reacción de hidrólisis del Bapna, elefecto de esta ultima se pudo haber determinado cuantitativamente mediante la determinación de las diferentes constantes del inhibidor, en cuyo caso se hace necesaria la realización de la cinética de inhibición para cada inhibidor y la determinación de la concentración de inhibidor en cada extracto con una curva de calibración con cada patrón de inhibidor. Sin embargo de manera cualitativa ya que seasume una concentración similar de inhibidor en cada extracto y basados en los resultados, se observa una afinidad muy grande del inhibir extraído del Frijol (90,6%), seguido del de Soya (59,5%) y una menor inhibición por parte del inhibidor de Garbanzo(27,3%) como se observa en los porcentajes de inhibición.

Analizaremos ahora el estudio cinético de la tripsina en presencia y en ausencia delinhibidor. Al observar la grafica de la variación de la velocidad con respecto a la concentración se observa un comportamiento típico de cinética de Michaelis-Mentel en el cual se nota para concentraciones bajas de sustrato una dependencia lineal de la velocidad con la misma, con una posterior disminución en la pendiente de la curva lo cual indica que se esta acercando a un valor limite cuando laenzima esta trabajando a su máxima capacidad y la velocidad no depende mas de la concentración de sustrato llegando a un valor máximo (Vmax). Por otro lado al analizar la cinética con y sin inhibidor se puede ver una disminución en las velocidades para la curva con inhibición lo cual indica que efectivamente se esta disminuyendo la concentración activa de inhibidor en el experimento limitando asíla velocidad máxima de la reacción. Esto es un primer indicio acerca del tipo de inhibición de nuestro experimento, el cual es estudiado más a fondo mediante la linealización de Burke-Lineweaver y el método de Eisenthal-Cornish-Bowden.

Debido a que no se nota una tendencia totalmente clara en la grafica de la linealización de Burke-Lineweaver y seria necesario descartar algunos datos pero notenemos un criterio tan claro para hacerlo, empleamos esta linealización solo de manera cualitativa para determinar de qué tipo de inhibición se trata de acuerdo a los comportamientos característicos a los cuales tenemos acceso en la bibliografía. En su lugar y con el objetivo de conservar la validez estadística de nuestros datos, emplearemos el método de Eisenthal-Cornish-Bowden. Al analizar lagrafica de la linealización de Burke-Lineweaver observamos el comportamiento típico de una cinética de inhibición no competitiva. En esta el corte con el eje X de la linealizacion del experimento con y sin inhibidor tiende a un mismo valor, lo que indicaría que la afinidad aparente de unión entre la enzima y el sustrato no varia, mientras se observa un aumento en la pendiente de la recta en el...