Fosfatasa

I. Datos:

1. Tabla #1: Absorción (405nm) vs. Volumen de p- nitrofenol (mL)
Solución
Volumen de p-nitrofenol (mL)
Absorción de nitrofenol (405 nm)
1
1.00
0.192
2
2.000.358
3
3.00
0.552
4
4.00
0.696
5
5.00
0.083

Método de preparación de cada solución:
Solución #1:
Esta solución fue preparada con 1mL de p-nitrofenol 60 mM y 5mL deNaOH 0.1 M.
Solución #2:
Esta solución fue preparada con 2mL de p-nitrofenol 60 mM y 4mL de NaOH 0.1M.
Solución #3:
Esta solución fue preparada con 3mL de p-nitrofenol 60 mM y3mL de NaOH 0.1 M.
Solución #4:
Esta solución fue preparada con 4mL de p-nitrofenol 60 mM y 2mL de NaOH 0.1 M.
Solución #5:
Esta solución fue preparada con 5mL de p-nitrofenol60 mM y 1mL de NaOH 0.1 M.
Tabla #2: Absorción (405nm) vs. Tiempo de reacción de Fosfatasa
Dilución de fosfatasa
Tiempo (min)
Absorción (405nm)
50%
10
0.437
50%
20
0.7820%
10
0.332
20%
20
0.553
10%
10
0.206
10%
20
0.291

Método de preparación de cada dilución:
Dilución 50%:
Esta dilución fue preparada con 1.0 mL de la enzima Fosfatasaa una concentración de 2mg/mL y 1.0 mL de BSA. Luego 1.0 mL de ésta fueron añadidos a una solución conteniendo 2.0 mL de buffer de citrato a pH 5 y 2.0 mL de sustrato NPP 2.5 mM.Dilución 20%:
Esta dilución fue preparada con 0.4 mL de la enzima Fosfatasa a una concentración de 2mg/mL y 1.6 mL de BSA. Luego 1.0 mL de ésta fueron añadidos a unasolución conteniendo 2.0 mL de buffer de citrato a pH 5 y 2.0 mL de sustrato NPP 2.5 mM.
Dilución 10%:
Esta dilución fue preparada con 0.2 mL de la enzima Fosfatasa a una concentraciónde 2mg/mL y 1.8 mL de BSA. Luego 1.0 mL de ésta fueron añadidos a una solución conteniendo 2.0 mL de buffer de citrato a pH 5 y 2.0 mL de sustrato NPP 2.5 mM.