fotocoliremetria

UNMSM
FM-EAP MH
BIOQUIMICA

PRÁCTICA FOTOCOLORIMETRÍA
Introducción
El análisis colorimétrico contempla al conjunto de métodos de análisis cuantitativo que se
fundamenta en la medición de la intensidad de la luz transmitida a través de una solución
coloreada, ya sea que se trate de sustancias naturalmente coloreadas o que se han hecho de tal
calidad mediante reacciones químicas adecuadas.Casi todas las sustancias en solución tienen la capacidad de absorber en forma selectiva
determinadas radiaciones luminosas unas más que otras, dejándolas pasar. La longitud de onda
en la que las moléculas de dicha sustancias absorben con mayor intensidad la luz, se denomina
longitud de máxima absorción o lambda máximo.
Si consideramos que cada molécula absorbe una determinada cantidad deluz, la
intensidad de la luz transmitida por una solución disminuirá en relación con el aumento del
número de moléculas que se interpongan entre la fuente luminosa y el observador. Este número
varía de acuerdo a la concentración del soluto y al espesor del recipiente que contiene la
solución, estos factores están considerados en la LEY DE LAMBERT Y BEER, que rige los
principios de lacolorimetría.
LEY DE LAMBERT
Expresa la proporcionalidad que existe entre la absorbancia de una solución coloreada y
la distancia que recorre el haz de luz monocromática en ella (sin variación de la concentración).
LEY DE BEER
Expresa la proporcionalidad que existe entre la absorbancia de una solución coloreada y
la concentración de ésta en un haz de luz monocromática (sin variación de la longitud querecorre el haz)
FÓRMULA
La expresión de relación de la ley de Lamber y Beer está dado por:
DO = E = A = l. c. e
donde:
DO es la densidad óptica.
E es la extinción.
A es absorbancia.
l es la longitud que atraviesa el haz de luz.
c es la concentración de la solución coloreada.
e es el coeficiente de extinción molar.
RELACION ENTRE ABSORBANCIA Y TRANSMITANCIA:
A = log Io/I1
Donde:
A esabsorbancia.
Io es la luz incidente.
I1 es la luz transmitida.

Práctica de fotocolorimetría

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CONCENTRACIÓN DE UNA MUESTRA
La mayor utilidad de la fotocolorimetría o espectrofotometría, es su aplicación para
conocer la concentración de una sustancia en una solución, comparándola con las absorbancia
de la misma sustancia pero en concentraciones conocidas.
La concentración de unamuestra se puede determinar por espectrofotometría por dos
maneras:
Método de la curva de calibración.
Método del factor de calibración.
CURVA DE CALIBRACION
El método consiste en emplear soluciones de concentraciones conocidas y crecientes
denominadas estándares o patrones a las cuales se les determinará su absorbancia ya sea en
un fotocolorímetro o en un espectrofotómetro y pueden serexpresadas en absorbancia.; en
cualquier caso los resultados se grafican en un sistema de coordenadas donde en el eje "X" se
gráfica la concentraciones y en el "Y" la absorbancia.
Los puntos resultantes en el sistema empleado se traza una recta de tal manera que
pase por el origen y que una en la medida posible a todos los punto o a la mayoría de estos. La
línea obtenida constituye la curva decalibración; también se le denomina curva estándar
Por ejemplo:
Supongamos los estándares de 1, 2, 4, 6 y 8 g/dL y sus absorbancias son 40, 81, 161,
238 y 323 respectivamente; con estos puntos podemos construir la gráfica.
Posteriormente leemos la muestra de concentración desconocida y la lectura la llevamos
al eje Y de la gráfica, extrapolamos y ubicamos el punto de corte con la línea luegose
ubica el punto de la recta que corresponde al componente del eje X y esta será la
concentración de la muestra analizada.
FACTOR DE CALIBRACION (Fc)
El factor de calibración es un término que relaciona la concentración de una sustancia
con su absorbancia.
Tiene la característica de ser un número constante o muy aproximado entre sí, a lo largo
de la curva de calibración y se cumple sólo...