Fotocolorimetria y curva de calibracion
OBJETIVOS
Analizar los principios generales de la técnica fotocolorimétrica.
Manejar adecuadamente el fotocolorímetro.
Determinar el espectro de absorción de un compuesto y seleccionar sulongitud de onda óptima o de máxima absorción.
FUNDAMENTO TEÓRICO
La fotocolorimetria es un método que sirve para hallar concentraciones de diferentes muestras. Esta técnica consiste enmedida la intensidad de luz absorbida (A) o transmitida (T) por una solución coloreada de uno o varios compuestos. La absorción máxima ocurre a una longitud de
onda característica para cada compuestoy la intensidad de la energía absorbida a esa longitud de onda, varia proporcionalmente con la concentración del compuesto en una solución.
Una sustancia es coloreada porque absorbe y transmiteradiación electromagnética en la región visible del espectro, es decir, entre 400 y 800 nm (). El color que se observa es una combinación de las longitudes de ondas no absorbidas, y por lo tanto,transmitidas por la sustancia.
Las primeras investigaciones sobre la relación existente entre las intensidades de radiación incidente y las intensidades de radiación transmitida, se destacan losexperimentos de Heindrich Lambert y Beer:
Ley de Lambert, “cuando un rayo de luz monocromático (de una única longitud de
Tabla # 1. Longitud de onda y sus correspondientes concentraciones.Absorbancia vs Concentración
Grafica # 2 Curva de calibración para 5 soluciones de ovoalbúmina con sus respectivas concentraciones.
*La muestra problema 1: Absorbancia es de 0,098, concentración0,492mg/ml.
*La muestra problema: Absorbancia es de 0,069, concentración 0,316mg/ml
Absorbancia
Concentración
Tubo # 1
0,024
0,2
Tubo # 2
0,137
0,6
Tubo # 3
0,213
1
Tubo # 4
0,273
1,4
Tubo# 5
0,268
1,8
Tabla # 2 Se presentan las correspondientes absorbancias de 5 soluciones de ovoalbúmina con sus respectivas concentraciones.
ANÁLISIS DE RESULTADOS
La fotocolorimetria es un...
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