fotocolorimetría

FOTOCOLORIMETRIA
I. INTRODUCCIÓN:

La fotocolorimetría es un método que sirve para hallar concentraciones de diferentes muestras y para seguir el curso de una reacción en experimentos de cinética química o enzimática. La técnica consiste en medir la intensidad de luz absorbida (A) o transmitida (T) por una solución coloreada de uno o varios compuestos. La absorción máxima ocurre a unalongitud de onda (λ) característica para cada compuesto y la intensidad de la energía absorbida a esa longitud de onda, varía proporcionalmente con la concentración del compuesto en una solución. El método parece estar restringido a las sustancias coloreadas, sin embargo también se puede extender a los compuestos incoloros, haciéndolos reaccionar con una especie que genere un productocoloreado. Absorción de energía por sustancias coloreadas 
Una sustancia es coloreada porque absorbe y transmite radiación electromagnética en la región visible del espectro, es decir, entre 400 y 800 nm (λ). El color que se observa es una combinación de las longitudes de onda no absorbidas, y por lo tanto, transmitidas por la sustancia. 
Una de las mediciones más frecuentes en bioquímica es la concentración de unasustancia y para su determinación se puede recurrir a dos métodos. Factor de calibración o curva de calibración .Esta última no siempre es correcta; es decir, sus puntos de intersección(X,Y)=(concentración, Absorbancia)no se encuentran coloniales, lo cual lleva a elaborar una curva irreal, no representativa de lo esperado.
La curva de calibración relaciona los datos de concentración contra susrespectivas absorbancias, por lo que se puede tomar como variable independiente las concentraciones (eje de las Y), siendo posible determinar la ecuación de la curva que se adapta mejor a los datos.

Y = a° + BX + E

a° = Verdadero valor de la intersección de la curva
B = Verdadero valor de la pendiente.
X,Y = X es una variable pre establecido o no aleatoria , se utilizapara hacer una predicción de Y.
E= Representa una variabilidad en toda medición causada por material de vidrio sucio, variación de temperatura, fluctuaciones eléctricas, variabilidad biológica, no linealidad, interferencias químicas, etc. Este valor no se toma en cuenta en la ecuación final por ser un valor constante.

Una de las consideraciones que se toma en cuenta un análisis deregresión lineal, es que para cualquier valor de X exactamente conocido, existen sendas distribuciones normales de valores de Y, quedando la ecuación reducida a:

Y = a + bx

“a” y “b” = son “coeficientes de regresión y reemplazan a a° y B respectivamente
Y = Denota el valor predecible de la media de Y para un valor dado de X.

Finalmente lo que interesa es determinar los“coeficientes de regresión”, aplicando el método de los “mínimos cuadrados”, luego hallar el valor de las nuevas lecturas aplicando:
Y = a + bx







II. OBJETIVOS

Aprender a ajustar matemáticamente curvas de calibración con dispersión, como consecuencia de errores.
Determinar el factor de calibración para cálculo de concentraciones.

III. EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS
EQUIPOSEspectrofotómetro

MATERIALES Y REACTIVOS

Soluciones a ensayar: sulfato de cobre, dicromato de potasio, rojo de metilo
Tubos de ensayo
Pipetas de 1 y 10 ml


IV. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL













V. RESULTADOS

Sol. Sulfato de Cobre (CuSO4):

TUBOS (ml)
I
II
III
IV
V
VI


D.O
475
0
0.002
0.003
0.003
0.008
0.005

500
0
0.003
0.004
0.0050.010
0.010

600
0
0.062
0.123
0.182
0.252
0.322
Concentración
0
0,1g
0,2g
0,3g
0,4g
0,5g


Sol. Dicromato de potasio (KCrO2):


TUBOS (ml)
I
II
III
IV
V
VI


D.O
475
0
0.169
0.321
0.496
0.651
0.850

500
0
0.066
0.120
0.186
0.243
0.320

600
0
0.005
0.003
0.002
0.001
0.002
Concentración
0
0,001g
0,002g
0,003g
0,004g
0.005g...