Fotosintesis

PRACTICA No. 3

“TECNICAS DE SIEMBRA”

Objetivo: El alumno conocerá y realizará las diferentes técnicas de siembra, así como el aislamiento de un cultivo bacteriano.

INTRODUCCIÓN:

Mediante la incorporación de un agente solidificante, como el agar, en un medio líquido, resulta un gel sólido cuando se vierte el medio de cultivo en una placa de petri cuando todavía está tibio (es decira más de 45º C) y se deja solidificar. Al extender una pequeñísima porción de la muestra, o bien una diminuta gota de un cultivo mixto en caldo, sobre la superficie de esta placa, se desarrollarán distintas colonias sobre la superficie de la placa. Colonias, como recordaremos, son los descendientes de una sola bacteria, agrupadas ahora en un “montoncito” visible.
Hay en la actualidad diferentesmétodos para extender una muestra bacteriana. La técnica de siembra por estría es una de las más usadas en microbiología; existen diferentes tipos de estrías como son:
a) Estría abierta
b) Estría cerrada
c) Estría cruzada

De estas la más común es la estría cruzada ya que puede haber un mayor crecimiento bacteriano. La técnica de estría cruzada se puede hacer de la siguiente manera..
A) Seusa una asa bacteriológica de alambre delgada para transferir la muestra o el cultivo. El asa se esteriliza colocándola sobre la flama del mechero hasta el rojo vivo.
B) El inoculo, cultivo o espécimen se extiende en una capa muy delgada sobre una pequeña área de la placa.
C) Partiendo de esta área se diluye el inoculo haciendo correr una serie de franjas (regueros) desde esa área al resto de laplaca siguiendo un patrón predeterminado.

Como la idea es diluir el inoculo, deben hacerse correr las franjas sólo en un sentido, evitando tocar otras franjas ya esparcidas, al hacer las siguientes. Si el inoculo contiene relativamente pocas bacterias, aparecerán colonias aisladas a lo largo de las primeras franjas o “regueros”.

Otra técnica de inoculación es por picadura y estría en tubocon agar inclinado y por disolución en medio de cultivo líquido.

Material:
- Medios de cultivo preparados en la sesión anterior
- 1 asa bacteriológica con círculo y 1 asa recta
- 1 par de guantes
- 1 cubrebocas
- 1 Mechero de flama alta
- 1 Marcador indeleble
- Cepas bacterianas de Escherichia coli (proporcionada por el profesor responsable)
- Algodón
- Benzal o Alcohol

METODOLOGÍA:1.- Se tomó la cepa bacteriana que nos proporcionó la profesora y con una asa bacteriológica, tomamos una pequeña porción del inoculo y por la técnica de estría abierta inoculamos en la placa de agar EMB. Todo el procedimiento de inoculación se hizo en condiciones estériles, cerca de los mecheros.



2.- Prosiguiendo el mismoprocedimiento pero ahora se realizó la siembra por la técnica de estría cruzada e inoculamos en la otra placa de agar EMB


3.- Tomamos la misma cepa bacteriana previamente esterilizada al fuego, y tomando una pequeña porción del inoculo con el asa bacteriologica, se inoculó por la técnica de picadura y estría en la parte inclinada del tubo conagar nutritivo.


4.-Se incubarón las placas a 37°C durante 24 horas. Después de la incubación, se observaron las características morfológicas de las colonias que hayan crecido en los medios de cultivo y tambien se contarón.

5.- Se dejo en el refrigerador .
.
Observaciónes
Tras dejar nuestras muestras incubar estas fueron lascolonias que encontramos
Medio EC, Técnica Cruzada Medio EC, Técnica abierta
114 colonias de tamaño chico 36 colonias chicas
45 colonias grandes 10 colonias grandes

Medio EMB, Técnica Cruzada Medio EMB, Técnica de estria abierta
6 colonias grandes 26 colonias grandes
55 colonias pequeñas 110 chicas

Tu


CUESTIONARIO:
1.- Al observar los medios de cultivo inoculados, ¿en cual de...