Fotosintesis

Trabajo práctico Nº5
Fotosíntesis

Bio-135 Sección 1

Introducción
La fotosíntesis es el proceso realizado por plantas de distinto tipo por el cual la energía lumínica es transformada en energía química, en resumen dada por la reacción:

6 CO2 + 6 H2O + luz → C6H12O6 + 6 O2 , para la fase lumínica en donde se depende de la luz solar la cual es absorbida por los distintos pigmentosencontrados en las hojas, estos pigmentos son encontrados en los tilacoides y estos a su vez bañados por una fase fluida llamada estroma, todo parte de un gran organelo llamado cloroplasto.También se produce la fotólisis del agua en donde protones, electrones y átomos de oxígeno. Los electrones son excitados y elevados a un nivel energético capaz de reducir NADP. El NADPH + H+ Los productos de lafase clara son la fotólisis del agua con la liberación de oxígeno, la formación de ATP y la reducción de NADP+. (1)
También podemos encontrar la fase oscura o también llamado ciclo de calvin es donde se fija el CO2 gracias al ATP generado previamente en ausencia de luz con el fin de generar azúcares. (1)

Pigmentos tales como la clorofila a son los encargados de convertir directamente la energíalumínica en química, absorbiendo la luz a 663 nm, también existe la clorofila b que absorbe a 645 nm y los carotenoides los cuales absorben a 470 nm con el fin de ayudar a ampliar el rango de absorción a la clorofila a. Los pigmentos de algas verdes y plantas superiores son compuestos solubles en solventes no polares y se organizan como complejos de pigmentos-proteínas tal como se mencionó en lamembrana de los tilacoides, en una fase lipídica, por esta razón no pueden ser extraídos.(2)
Las clorofilas tienen un átomo de magnesio enlazado centralmente en el anillo tetrapirrólico, ademas de un grupo fitólico; La clorofila a tiene en el anillo II y la b uno formilo, de ahí los distintos espectros de absorción de la luz. Las clorofilas a y b tienen sus máximos espectros de absorción en laluz azul y roja, en cambio los carotenoides solo en la azul. (2)
La ecuación de Arnon nos permite calcular la cantidad de clorofila en miligramos por ml al ser arrastrada por cetona y esta dada por:
[Clorofila] = 2.9 x A652 (3)




Objetivos:
_ Observar luego de una hora hojas de tabaco en agua, una en presencia de luz y otra en ausencia de luz.
_ Extraer cloroplastos de hojas deespinaca y cuantificar clorofila a y b.



Materiales y Métodos
Identificación de la ocurrencia de la fase clara de la fotosíntesis:
2 Hojas de tabaco
2 Vasos precipitados 100 mL
Lámpara
Agua de la llave
Parafilm
Papel aluminio
Para este práctico se utilizan 2 hojas de tabaco, las cuales previamente lavadas con agua de la llave se colocan cada una en un vaso precipitado de 100 mL y sellenan con agua de la llave hasta el tope. El primer vaso precipitado lo llamaremos fase clara, este vaso se cubre con parafilm en su parte abierta de manera que no queden burbujas de aire y que no se filtre al invertirlo, luego se invierte y se coloca en un mesón dónde la luz de la lámpara llegue hasta la hoja de tabaco en el interior del vaso precipitado y se incuba durante 1 hora a temperaturaambiente. El segundo vaso precipitado lo llamaremos fase oscura, este vaso se cubre completamente con papel aluminio y se incuba durante una hora a temperatura ambiente.
Extracción de cloroplastos:
Materiales:
Tijeras
Espinaca
Mortero pre-enfriado
Buffer Sacarosa pre-enfriado (0.38 M Sacarosa, 0.07 M K2HPO4, 0.01 M KCl, pH 7.5)
Hielo
Centrífuga
Acetona 80%
Balanza
Pipeta
Gasa
Vasoprecipitado
2 Tubo eppendorf 2 mL
2 Tubos Falcon
Se pesa 5 gramos de espinaca evitando dejar la vena principal, se lava y se seca. La espinaca se corta con tijeras lo más que se pueda y se coloca en un mortero pre-enfriado para molerla. Luego se homogeniza con 15 mL de Buffer Sacarosa pre-enfriado pero en nuestro caso lo hicimos con 25 mL por error y se filtra con una gasa en un vaso precipitado...