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FUNDAMENTOS DE QUÍMICA-PRÁCTICA 9

PRÁCTICA 9:
CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE ADSORCIÓN
EN COLUMNA (CC) Y CAPA FINA (TLC)

1. INTRODUCCIÓN
La cromatografía es un método físico de separación basado en la diferencia de
distribución de los componentes de una mezcla entre dos fases inmiscibles, una móvil y
otra estacionaria. Las moléculas de soluto de la mezcla son retenidas por la fase
estacionaria yarrastradas por la fase móvil, de manera que si los componentes de la
mezcla presentan diferentes afinidades por alguna de las fases, sus velocidades medias
de avance a lo largo del sistema serán diferentes. La afinidad viene determinada por
fuerzas de tipo Van der Waals, puentes de hidrógeno o transferencia de carga. Los
componentes que sean fuertemente retenidos por la fase estacionaria se moveránmás
lentamente a lo largo de dicha fase que aquellos que se unen débilmente. Como
consecuencia de esta diferencia de movilidad los componentes de la mezcla se separan
en bandas discretas, que pueden analizarse cualitativa o cuantitativamente mediante el
uso de los detectores adecuados.

Fase móvil
Fase
estacionaria

La cromatografía es una técnica extremadamente versátil, que permite tanto laseparación de mezclas como la purificación de productos, la determinación del grado de
pureza de un compuesto, el seguimiento de reacciones o la detección y caracterización
de compuestos. Su principal ventaja frente a otros métodos de separación y purificación

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consiste en que ésta técnica puede aplicarse a cantidades muy pequeñas de producto (del
orden del µg).Las técnicas cromatográficas se pueden clasificar atendiendo a varios criterios:
naturaleza de las fases (sólido, líquido, gas), relación de polaridad de las fases (fase
normal, fase inversa), mecanismo de separación (adsorción, exclusión, intercambio
iónico, reparto, afinidad), disposición de las fases (en columna, en plano) y forma de
desarrollo del proceso (frontal, de desplazamiento, deelución). En la siguiente tabla se
da una relación general de los diferentes métodos cromatográficos basada en la
naturaleza de la fase móvil:

Clasificación general
Cromatografía líquida
(LC)
Cromatografía gaseosa
(GC)
Cromatografía de fluidos
supercríticos (SFC)

Fase estacionaria

Fase móvil

sólido

líquido

resina cambiadora
líquido
líquido
sólido
sólido-especies
orgánicas

líquido
líquido
gas
gasfluido
supercrítico

Mecanismo de
separación
adsorción
exclusión
intercambio iónico
reparto
adsorción
adsorción
reparto

En la presente práctica se estudiarán dos tipos de cromatografía líquida:
Cromatografía de adsorción en columna (CC)
Cromatografía de adsorción en placa fina (TLC)
En ambas técnicas la fase móvil está constituida por un líquido, la fase
estacionaria por un sólido y el mecanismo deseparación se basa en la diferencia de
adsorción de los componentes de la mezcla en la superficie activa de la fase
estacionaria. En la primera (CC) la fase estacionaria se sitúa en un tubo (columna), en la
segunda (TLC) se deposita sobre una superficie abierta plana.
La cromatografía líquida suele emplearse para compuestos de poca volatilidad,
tales como moléculas grandes y altamente polares, alos que no es aplicable la
cromatografía de gases.

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2. CROMATOGRAFÍA DE ADSORCIÓN EN COLUMNA (CC)
En la figura 1 se muestra esquemáticamente una columna cromatográfica. La
fase estacionaria consiste en un sólido adsorbente empaquetado en una columna de
vidrio. La mezcla a separar (muestra) se deposita sobre la superficie superior de la fase
estacionariaquedando adsorbida en ella. A continuación, se permite el paso de la fase
móvil (eluyente)a lo largo de la columna a través de la fase estacionaria. Durante el
proceso cromatográfico los componentes de la muestra son arrastrados por la fase móvil
a distintas velocidades efectuándose la separación. La velocidad de arrastre de cada
componente depende de su grado de adsorción en la fase estacionaria y...