Fraccionamiento subcelular

INTRODUCCION

¿Qué significa estar vivo?

Todos los organismos vivos están formados por células: unidades pequeñas rodeadas de una membrana que contienen una solución acuosa concentrada de sustancias químicas y dotadas de la extraordinaria capacidad para crear propias de sí mismas mediante el crecimiento y la división de dos células (fisión). Las células aisladas son las más simples.TEORÍA CELULAR
(Theodor Schwann y Mathias J. Schleiden. 1839)

• Todos los seres vivos estamos formados por células.
•Todas las células proceden de células preexistentes
•La célula es la unidad fundamental de la vida.

Cada célula es capaz de llevar a cabo una variedad de tareas biológica, porque está constituida de diferentes organelos, subconjuntos que componen una célula, comoson las mitocondrias, los ribosomas, los lisosomas, el núcleo (organelo más grande de la célula), El retículo endoplasmático, El aparto de Golgi, La membrana plasmática, entre otros.
Cada uno de los organelos anteriores nombrados de la célula, serán separados de la celular para eso en este laboratorio trabajaremos con una técnica denominada Fraccionamiento subcelular, valga la redundancia, paraseparar los organelos de la célula.
El Fraccionamiento subcelular fue desarrollado entre 1940 y 1950 por Albert Claude y Cristian de Duve entre otros y consiste en la separación de los componentes de la célula basándose específicamente en su tamaño y densidad.
Si un tejido puede ser separado en las células, la célula puede ser separada en los diferente organelos y macromoléculas.Para observar lo que hay en el interior de la célula tenemos que romperla, pero no basta con romperlas, hay compuestos unidos a la membrana, de manera que por centrifugación podemos precipitarlos y obtener los distintos componentes.
Como para un comienzo es importante la ruptura u homogenización de la muestra, en esta etapa se rompen muchas de las membranas de la célula. Incluyendo la mismamembrana plasmática y el retículo endoplasmático.
Se conlleva a una centrifugación a velocidades bajas, que se pueden distinguir dos fases en el fondo en pellet y sobre él, el sobrenadante, en la primera centrifugación el pellet obtenido esta enriquecido de núcleos y el sobrenadante contienen componentes celulares en suspensión.
El sobrenadante es sometido a la segunda centrifugación que serealiza a velocidades intermedias y el nuevo sobrenadante se re-centrifuga a velocidad alta obteniendo el pellet enriquecido en membrana plasmática y retículo endoplasmático (fracción microsomal)
Es muy importante que todo el proceso se realice en frió (4ºC) para evitar una posible degradación de las estructuras celulares y así conservar intactas la mayor parte de las características funcionales.… “Las células son la unidad básica de la materia viviente, nada inferior a la célula puede ser denominado con propiedad de estructura viviente”…
Por lo que es importante cada una de las partes que constituyen a la célula.

Citaciones:
Elementos de la biología celular y genética, parte 2
Biología celular y molecular, parte 11
Introducción a la Biología celular, Capitulo 1

OBJETIVOEl objetivo general del laboratorio se centra en que el alumno comprenda el fundamento de la técnica de fraccionamiento subcelular por medio del rompimiento de la célula y la separación de los organelos mediante un campo gravitacional.

MATERIALES Y METODOS



Materiales por grupo:

Actividad Nº1:

A)

Materiales utilizados en grupo:
• 50 ml de Buffer IBcfrío
• Ratón adulto (cercade 30 gr) muerto por dislocación cervical
• Hígado de ratón
• Tijeras
• Fuentes de Hielo
• Tubo homogenizado
• Vaso pequeño
• Hielo
B)
• Microscopios
• Portaobjetos
• Cubreobjetos
• Hielo
• Azul de tripán
• 4 tubos de ensayo
• Solución de succinato 0,1 M
• Solución de azul de metileno
• Solución de agua destilada
• 2 mL de aceite mineral o vaselina líquida
• Termorregulador...