fracionamiento celular

FRACCIONAMIENTO CELULAR
Alberts Claude y Christian Duve entre 1940 y 1950 desarrollan una técnica llamada “Fraccionamiento Celular”, la cual consiste en la separación de los componentes de la célula basada en el tamaño y densidad.
Así mismo, se menciona que el fraccionamiento celular es un conjunto de métodos y técnicas que tienen como objetivo obtener fracciones puras o enriquecidas en undeterminado componente celular, ya sea éste un orgánulo como mitocondrias, núcleos, peroxisomas; una fracción de membrana entre las cuales se encuentra la membrana total, plasmática, o bien complejos multiproteicos como cito esqueleto de actina, micro túbulos, poros nucleares, etc.  
FASES
El fraccionamiento celular cuenta con tres fases:
Pre analítica: consiste en la obtención preparaciónpreliminar de la muestra hasta llegar al laboratorio
Analítica o de aplicación de procedimientos. Toma y da tratamiento de datos, recogida de resultados en un informe
Post analítica: se encarga de la Validación técnica del informe analítico.
ETAPAS
Todo proceso de fraccionamiento celular consta de dos etapas de procedimiento
Rotura de las células o tejidos para obtener un lisado celular (otisular) en el que la fracción deseada se encuentre en condiciones adecuadas para su purificación.

Separación de la fracción deseada del resto de componentes de la célula o del tejido mediante algún criterio como puede ser una diferencia de densidad, la presencia de algún antígeno,etc.
       
El proceso de fraccionamiento consta principalmente de las siguientes etapas:

HOMOGENIZACIÓN
Parapreparar los tejidos para el fraccionamiento celular, primero se debe suspender en un medio apropiado una solución amortiguadora, salina  ó azúcar isotónica, Para mantener  la integridad de los organelos y enzimas durante el procedimiento de la fraccionación, todas las soluciones y cristalería debe mantenerse frías. Después de rebanar las hojas, el tejido está preparado para la homogenización,procedimiento que rompe los enlaces celulares y libera el contenido celular, sin dañar el medio en suspensión. La suspensión de células constituyentes se llama homogenado. Para los tejidos de plantas, la homogenización se debe realizar con un mortero, al cual se le añade arena como abrasivo. 

CENTRIFUGACION
Debido a las diferencias en tamaño y densidad, cada componente celular está sujeto a unafuerza centrífuga. La fuerza generada por la centrífuga se expresa como fuerza centrífuga relativa (RCF)en unidades de g.  La RCF es una función de velocidad de centrifugación en revoluciones por minutos (rpm) y la distancia de partículas desde el eje de rotación.
 
CENTRIFUGACION DIFERENCIAL
 En la centrifugación diferencial, el homogenado es centrifugado repetidas veces  a altas velocidades,sedimentándolo progresivamente en pequeñas partículas. El material sedimentado se conoce como fracción mitocondria ; éste contiene mitocondria y micro cuerpos.
 
CROMATOGRAFÍA
Cromatografía, fue empleada por primera vez por el científico ruso-italiano Mikhail Tsvet en 1900. Siguió trabajando con la cromatografía en la primera década del siglo 20, principalmente para la separación de lospigmentos vegetales como la clorofila, carotenos y xantofilas. Dado que estos componentes tienen diferentes colores que dio la técnica de su nombre. Nuevos tipos de cromatografía desarrollados durante los años 1930 y 1940 hicieron la técnica útil para muchos procesos de separación.
Técnica de cromatografía desarrollado sustancialmente como resultado del trabajo de Archer John Porter Martin y RichardLaurence Millington Synge durante los años 1940 y 1950. Se establecieron los principios y técnicas básicas de la cromatografía de reparto, y su trabajo alentó el rápido desarrollo de varios métodos cromatográficos: cromatografía en papel, cromatografía de gases, y lo que se conocería como la cromatografía líquida de alta resolución. Desde entonces, la tecnología ha avanzado rápidamente. Los...