Fragilidad Osmotica De Los Eritrocitos

MARIO MONTERO MONTES

UNIVERSIDAD VERACRUZANA
FACULTAD DE QUÍMICA FARMACÉUTICA BIOLÓGICA
LABORATORIO DE BIOLOGÍA CELULAR

PRÁCTICA No. 07
FRAGILIDAD OSMÓTICA DE LOS ERITROCITOS

OBJETIVO:
Aprender a realizar la determinación de la fragilidad osmótica de los eritrocitos para demostrar el fenómeno de osmosis.

FUNDAMENTO:
Existen varios métodos para medir la presiónosmótica celular; la mayor parte son físicos. Algunos de éstos métodos son utilizando tanto a la zanahoria como al celofán, por lo que es conveniente comparar los anteriores modelos utilizando células vivas, como en este caso serán glóbulos rojos. La forma de disco bicóncavo del eritrocito normal, implica un exceso de extensión superficial con relación a su volumen, lo que le proporciona una grancapacidad de deformabilidad. Como la membrana eritrocitaria es semipermeable, cuando los eritrocitos son colocados en una solución hipotónica, el agua entra osmóticamente haciendo que aumente el volumen y adquiere la forma esférica. Con ello, la superficie disminuye respecto a su volumen dando a la célula cierto grado de rigidez que interfiere con el paso de la misma a través de pequeñas aberturas,por lo que fácilmente se rompe. Otro fenómeno adicional es la salida de hemoglobina, que es permitida por el estiramiento de la membrana eritrocitaria. En esta práctica se harán una serie de diluciones de NaCl, de concentración progresiva, en las que los eritrocitos problema se someterán a diferentes concentraciones y se valorará la concentración de NaCl que produce la hemólisis en comparacióncon una sangre normal. (1)

GENERALIDADES:
La prueba de fragilidad osmótica es una medida de la resistencia del eritrocito, a la hemólisis por estrés osmótico, la cual depende principalmente del volumen de la célula, del área de su superficie y de la función de su membrana (Ver Fig. 8.1). Los eritrocitos se incuban en solución hipotónica de NaCl, los eritrocitos absorben agua en unesfuerzo para conservar o para lograr el equilibrio osmótico, y las células se hinchan hasta que se forma un esferocito. La captación adicional del agua produce una membrana porosa que permite la liberación de hemoglobina (hemólisis). Las células normales comienzan a hemolizar a concentraciones de NaCl cercanas a 0.50% y la hemólisis es completa a una concentración aproximadamente de 0.30 % de NaCl.Debido a la disminución en la proporción de superficie a volumen, los esferocitos son incapaces de expandirse tanto como las células normales de forma discoide. Se necesita absorber muy poco liquido antes que las células se hemolicen. Los esferocitos también tienen un aumento en la permeabilidad de la membrana, la cual contribuye al aumento de su fragilidad. (4)MATERIAL:
• Centrífuga.
• Gradilla.
• 16 tubos de ensayo de 13 x 100 mm.
• Equipo de venopunción.
• Papel parafilm.
• Pipetas graduadas de 5 ml.
• Pipeta graduada de 0.2 ml.

MATERIAL BIOLÓGICO:
• Sangre obtenida con EDTA.

REACTIVOS:
• Solución salina al 1% tamponada, pH 7.4

TECNICA:
1. Se obtienen 5 ml de sangre venosa y semezclan perfectamente.
2. Se colocan 16 tubos de ensayo en una gradilla y se numeran de izquierda a derecha.
3. Montar la prueba de la siguiente manera:

|# de tubo |ml de sol. salina al 1% tamponada |ml de agua destilada |Concentración de la solución (%) |
|1 |3.8 |1.2 |0.76|
|2 |3.6 |1.4 |0.72 |
|3 |3.4 |1.6 |0.68 |
|4 |3.2 |1.8 |0.64...