Fragilidad Osmotica y Ciclaje

Prueba de fragilidad osmótica
La membrana eritrocitaria es semipermeable, lo cual le confiere la capacidad de permitir el paso libre del agua y la capacidad de restringir el paso de ciertos solutosiónicos, a causa de esto el eritrocito al ser incubado en medios de concentración iónica superior al existente en su citoplasma se produce un efecto osmótico, caracterizado por el paso de agua desdeel interior al exterior de la célula la cual le genera deshidratación. Por el contrario, si el medio tiene una concentración iónica menor a la del eritrocito, el agua atraviesa la membrana y eleritrocito se hidrata.
Procedimiento:
La determinación de la fragilidad osmótica se realiza a partir de sangre recién extraída (dentro de las 2 horas después de practicar la extracción). Una vezpreparadas las soluciones hipotónicas se procede a:
a) Se colocan 2.5ml, de cada una de ellas en una batería de tubos y a continuación se añade a cada uno 0.02 ml (20µl) de sangre total, después agitarsuavemente los tubos por inversión, se dejan a temperatura ambiente por 30 minutos.
b) Transcurrido este tiempo, los tubos se vuelven a agitar suavemente y se centrifugan a 1500-2000 RPM por 5minutos.
c) El grado de hemolisis presente en cada sobrenadante se determina mediante el empleo de un colorímetro o espectrofotómetro (550nm), considerado el 100% de hemolisis el tubo con 0.05 gr% deNaCl y 0% (blanco) el tubo con 0.9gr% de NaCl.

Resultados:
CONCENTRACIÓN NaCl (%) | ABSORBANCIA | % HEMOLISIS |
0,75 |0 | 0 |
0,7 | 0 | 0 |
0,65 | 0 | 0 |
0,6 | 0 | 0 |
0,55 | 0 | 0 |
0,5 | 0 | 0 |
0,45 | 0,016 | 3,55 |
0,4 | 0,356 | 79,11 |
0,35 | 0,382 | 84,8 |
0,3 | 0,45 | 100 |
0,25 | 0,45 |100 |
0,2 | 0,45 | 100 |
0,15 | 0,45 | 100 |

Valores obtenidos:
Hemolisis Normal
10% 0.44 0.44 – 0.48
50% 0.42 0.42
90% 0.37...