Frotis
Páginas: 5 (1125 palabras)
Publicado: 29 de abril de 2012
FROTIS DIRECTOS TEÑIDOS CON GRAM
En los frotis directos teñidos con Gram provenientes de muestras clínicas, los estafilococos aparecen como cocos grampositivos o gramvariables de un tamaño que varía de 0,5 um a más de 1 um de diámetro. Los microorganismos pueden aparecer aislados, en pares, en cadenas cortas o en grupos, tanto dentro como fuera de leucocitos polimorfonucleares. Es probable quelas variaciones en el tamaño de las células y en la reacción a la coloración de Gram se deban a la acción de las células inflamatorias y de sus emzimas hidrolíticas sobre las células bacterianas. En los frotis directos los pares y las cadenas cortas no pueden ser diferenciados de los estreptococos, los micrococos o los peptoestreptococos, aunque los estreptococos suelen aparecer como cadenas dediplococos en lugar de cómo cadenas de células individuales separadas. Los informes de los frotis directos deben incluir la cuantificación de los tipos celulares y de los microorganismos (p. ej., “abundantes PMN, moderada cantidad de cocos grampositivos”). Si la coloración de Gram presenta un aspecto más típico puede emitirse un informe de “cocos grampositivos similares a estafilococos”, conconfirmación posterior por cultivo.
Metodología
* Recoger muestras.
* Hacer el extendido en espiral.
* Dejar secar a temperatura ambiente.
* Fijar la muestra con metanol durante un minuto o al calor (flameado 3 veces aprox.)
* Agregar azul violeta (cristal violeta o violeta de genciana) y esperar 1 min. Todas las células gram positivas y gram negativas se tiñen de colorazul-purpura.
* Enjuagar con agua.
* Agregar lugol y esperar entre 1 minuto.
* Enjuagar con agua.
* Agregar acetona y/o alcohol y esperar 4 segundos (parte critica de la coloracion)
* Enjuagar con agua.
* Tinción de contraste agregando safranina o fucsina básica y esperar 1-2 min Este tinte dejará de color rosado-rojizo las bacterias Gram negativas.
* Enjuagar con agua.
*Para observar al microscopio óptico es conveniente hacerlo a 100x con aceite de inmersión.
Fijar un frotis
Con la ayuda de un mechero, flamear un asa bacteriológica y esperar que enfríe un poco.
Tomar el asa (previamente flameada) y con ésta tomar un poco de muestra.
Una vez obtenida una pequeña cantidad de la muestra (con el asa), hacer que ésta tenga contacto con una lámina portaobjetos, lacual servirá para depositar la muestra contenida en el asa.
Con el asa (conteniendo la muestra) sobre la lámina portaobjetos, proceder a realizar la extensión de la muestra en el portaobjetos mediante movimientos giratorios (dar vueltas con el asa) sobre la lámina, de tal forma que al terminar la extensión, tengamos como producto una espiral en la parte media de la lámina.
Esperar que seque alaire libre o ayudarse con la llama de un mechero para fijar la muestra, teniendo en cuenta que el calor no debe ser directo (sólo se pasa por la llama), puesto que el calor excesivo puede cambiar la morfología celular de las bacterias a observar. El calor deseable es aquél en el que el portaobjetos sea apenas demasiado caliente para ser colocado sobre el dorso de la mano.
LA PRUEBA DE LACOAGULASA
La Coagulasa es una proteína que se usa para distingir entre diferentes tipos de Staphylococcus. S.aureus produce 2 formas de coagualasa (por ejemplo, coagulasa ligada y coagulasa libre). La coagulasa ligada también conocida como "factor de Clumping " se puede detectar mediante la realización de una prueba de portaobjetos y la coagulasa libre con una prueba de coagulasa de tubo.
Prueba deltubo de ensayo
Coágulos formados por la reacción de la coagulasa en un tubo de ensayo. La prueba se utiliza plasma que ha sido inoculado con una colonia de staphylococcal (por ejemplo, con un coco Gram positivo catalasa positivo). Luego el tubo se incuba a 37 grados Celsius en 1½ horas. Si es negativo entonces continuamos la incubación por unas 18 horas.
Si sale positivo (por ejemplo, la...
En los frotis directos teñidos con Gram provenientes de muestras clínicas, los estafilococos aparecen como cocos grampositivos o gramvariables de un tamaño que varía de 0,5 um a más de 1 um de diámetro. Los microorganismos pueden aparecer aislados, en pares, en cadenas cortas o en grupos, tanto dentro como fuera de leucocitos polimorfonucleares. Es probable quelas variaciones en el tamaño de las células y en la reacción a la coloración de Gram se deban a la acción de las células inflamatorias y de sus emzimas hidrolíticas sobre las células bacterianas. En los frotis directos los pares y las cadenas cortas no pueden ser diferenciados de los estreptococos, los micrococos o los peptoestreptococos, aunque los estreptococos suelen aparecer como cadenas dediplococos en lugar de cómo cadenas de células individuales separadas. Los informes de los frotis directos deben incluir la cuantificación de los tipos celulares y de los microorganismos (p. ej., “abundantes PMN, moderada cantidad de cocos grampositivos”). Si la coloración de Gram presenta un aspecto más típico puede emitirse un informe de “cocos grampositivos similares a estafilococos”, conconfirmación posterior por cultivo.
Metodología
* Recoger muestras.
* Hacer el extendido en espiral.
* Dejar secar a temperatura ambiente.
* Fijar la muestra con metanol durante un minuto o al calor (flameado 3 veces aprox.)
* Agregar azul violeta (cristal violeta o violeta de genciana) y esperar 1 min. Todas las células gram positivas y gram negativas se tiñen de colorazul-purpura.
* Enjuagar con agua.
* Agregar lugol y esperar entre 1 minuto.
* Enjuagar con agua.
* Agregar acetona y/o alcohol y esperar 4 segundos (parte critica de la coloracion)
* Enjuagar con agua.
* Tinción de contraste agregando safranina o fucsina básica y esperar 1-2 min Este tinte dejará de color rosado-rojizo las bacterias Gram negativas.
* Enjuagar con agua.
*Para observar al microscopio óptico es conveniente hacerlo a 100x con aceite de inmersión.
Fijar un frotis
Con la ayuda de un mechero, flamear un asa bacteriológica y esperar que enfríe un poco.
Tomar el asa (previamente flameada) y con ésta tomar un poco de muestra.
Una vez obtenida una pequeña cantidad de la muestra (con el asa), hacer que ésta tenga contacto con una lámina portaobjetos, lacual servirá para depositar la muestra contenida en el asa.
Con el asa (conteniendo la muestra) sobre la lámina portaobjetos, proceder a realizar la extensión de la muestra en el portaobjetos mediante movimientos giratorios (dar vueltas con el asa) sobre la lámina, de tal forma que al terminar la extensión, tengamos como producto una espiral en la parte media de la lámina.
Esperar que seque alaire libre o ayudarse con la llama de un mechero para fijar la muestra, teniendo en cuenta que el calor no debe ser directo (sólo se pasa por la llama), puesto que el calor excesivo puede cambiar la morfología celular de las bacterias a observar. El calor deseable es aquél en el que el portaobjetos sea apenas demasiado caliente para ser colocado sobre el dorso de la mano.
LA PRUEBA DE LACOAGULASA
La Coagulasa es una proteína que se usa para distingir entre diferentes tipos de Staphylococcus. S.aureus produce 2 formas de coagualasa (por ejemplo, coagulasa ligada y coagulasa libre). La coagulasa ligada también conocida como "factor de Clumping " se puede detectar mediante la realización de una prueba de portaobjetos y la coagulasa libre con una prueba de coagulasa de tubo.
Prueba deltubo de ensayo
Coágulos formados por la reacción de la coagulasa en un tubo de ensayo. La prueba se utiliza plasma que ha sido inoculado con una colonia de staphylococcal (por ejemplo, con un coco Gram positivo catalasa positivo). Luego el tubo se incuba a 37 grados Celsius en 1½ horas. Si es negativo entonces continuamos la incubación por unas 18 horas.
Si sale positivo (por ejemplo, la...
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