Fundamento De Tinciones

TINCIÓN DE GRAM
Cristal Violeta
Fundamento
El violeta cristal es un colorante básico bacteriostático potente, especialmente contra microorganismos gran positivos, las bacterias gran negativas son alterada en poco grado.
Preparación y reactivos
Cristal violeta (violeta de genciana)....................................................0,5 g
Aguadestilada.................................................................................100 ml
-Disolver el colorante en el agua
Usos
• Reacciona con radicales ácidos. Mecanismo de acción bacteriostático; probablemente forma sales con los ácidos nucleicos.
• Se emplea en medio de cultivo selectivo, antiséptico de piel y membrana bucales, inhibe las bacterias gran – positivas.
• El cristal violeta (colorante catiónico) penetraen todas las células bacterianas (tanto Gram positivas como Gram negativas), ergo su uso en la tinción de Gram
Lugol
Fundamento
El lugol está formado por I2 (yodo) en equilibrio con KI (yoduro de potasio), el cual está presente para solubilizar el yodo. El I2 entra en las células y forma un complejo insoluble en solución acuosa con el cristal violeta.
Preparacíon y reactivosYodo...................................................................................................1 g
Yoduro potásico..................................................................................2 g
Agua destilada.................................................................................300 ml
- Combinar el yodo y el yoduro de potasio con la ayuda de un mortero.
- Lavar el contenido de éstecon pequeñas alícuotas de agua destilada.
- Agregar agua suficiente para obtener un total de 300 mL.
- Agitar fuertemente.
- Almacenar la solución en una botella oscura y con tapón de vidrio.
Usos
• Se puede usar como un colorante para células, haciendo el núcleo celular más visible en microscopías y para preservar muestras defitoplancton.
• En una colposcopía, la disolución deLugol se utiliza en la Prueba de Schiller en busca de tejido vaginal canceroso.
• Se puede usar la disolución de Lugol para observar la forma en la que la membrana celular hace ósmosis y difusión.
Alcohol-acetona
Fundamento
La membrana externa de las Gram negativas es soluble ensolventes orgánicos, como por ejemplo la mezcla de alcohol/acetona. La capa de peptidoglucano que posee es demasiadodelgada como para poder retener el complejo de cristal violeta/yodo que se formó previamente, y por lo tanto este complejo se escapa, perdiéndose la coloración azul-violácea. Pero por el contrario, las Gram positivas, al poseer una pared celular más resistente y con mayor proporción de peptidoglicanos, no son susceptibles a la acción del solvente orgánico, sino que esteactúa deshidratando los poros cerrándolos, lo que impide que pueda escaparse el complejo cristal violeta/yodo, y manteniendo la coloración azul-violácea.
Preparación y reactivos
Alcohol etílico (95%)................................ 500 mL
Acetona.................................................... 300 Ml
- Mezclar los ingredientes respectivos de cada combinación para su uso.
Safranina
Fundamento
La safranina puede o noutilizarse, no es crucial para la técnica. Sirve para hacer una tinción de contraste que pone de manifiesto las bacterias Gram negativas
Preparación y reactivos
Safranina (pureza del colorante, 90%)....... 0.25 g
Alcohol etílico (95%)...................................... 10 mL
Agua destilada............................................ 1000 Ml
- Disolver el colorante en el alcohol.
-Agregar el agua destilada.
- Filtrar.
- Almacenar en frasco con tapón de vidrio.

TINCIÓN ZIEHL-NEELSEN (BAAR)
Carbol fucsina
Fundamento
Se aplica con calor de modo de “ablandar” y permeabilizar la pared celular
Preparación y reactivos
0,5 g fucsina básica
50 cc agua destilada
5 cc etanol absoluto
28,5 g cristales de fenol derretidos
-Mezclar en el orden citado
Hematoxilina...