Gabo

Universidad Autónoma de Ciudad Juárez.
Instituto de Ciencias Biomédicas.
Departamento de Ciencias Químico-Biológicas.
Academia de Bioquímica.
Programa 23100 Médico Cirujano.
Laboratorio de Bioquímica.
Equipo No 1.
Práctica No 9.
“Extracción de glucógeno y reacción de identificación de carbohidratos”.
Profesor de laboratorio: M. en C. Gabo Nopales.


Ciudad Juárez, Chihuahua a 07 demayo del 2012.
“Extracción de glucógeno y reacción de identiicación de carbohidratos.”

Introducción.
Los carbohidratos, son sustancias compuestas de carbono, hidrogeno y oxígeno. Se clasifican en mono, oligo y polisacáridos. La glucosa es un monosacárido, el carbohidrato más abundante en la naturaleza. Los animales la obtienen al consumir alimentos que la contiene, mientras que lasplantas lo hacen por medio de la fotosíntesis. Los mamíferos pueden convertir la sacarosa, lactosa, maltosa y almidon en glucosa, la cual se oxida para obtener energía, o la almacenan como glucógeno. Cuando el organismo necesita energía, el glucógeno es convertido de nuevo a glucosa. Las plantas convierten el exceso de glucosa en un polímero llamado almidón que es equivalente al glucógeno, o encelulosa, que es el principal polímero estructural.
El glucógeno es un polisacárido ramificado de glucosa, consta de unidades de glucosa unidas por enlace glucosídico α(1-4) formando cadenas; cada 8 ó 10 unidades de glucosa, la cadena presenta ramificaciones que se unen mediante enlace α(1-6). Su estructura, permite la rápida síntesis y degradación de la glucosa. El hígado (entre 3-5 g por 100g de tejido fresco) y en, en menor medida, el músculo esquelético. El ayuno disminuye las reservas de glucógeno fundamentalmente hepático.
* Reacción de Molisch.
Este compuesto, determina la presencia de glúcidos en el medio. El ácido sulfúrico es utilizado como agente de deshidratación. El proceso consiste en la formación de un producto de condensación color púrpura, que se obtiene alreaccionar el hidrato de carbono en el medio ácido con el reactivo de Molisch que contiene α-naftol.

* Reacción de Lugol.
El reactivo de Lugol que contiene una mezcla de yodo y yoduro, permite reconocer polisacáridos, particularmente el almidón por la formación de una coloración azúl-violeta intensa se debe, posiblemente a la formación de un complejo: Ioduro de almidón y el glicógeno y lasdextrinas por formación de coloración roja.

* Reacción de Seliwanoff.
Este ensayo es específico para cetosas y se basa en la conversión de la cetosa en 5-hidro-metil-furfural y su posterior condensación con resorcinol formando así complejos coloreados de un rojo intenso. Este fenómeno es desencadenado porque las cetosas se deshidratan a mayor velocidad que las aldosas.

* Reacción deFehling.
Es un método basado en la reducción del ión cúprico, color azul, a cuproso, que da un precipitado rojo ladrillo en presencia de glucosa, en caliente y en medio alcalino fuerte. Consta de dos soluciones, que no se mezclan para evitar precipitados.
*Reactivos:
1) Solución A:
SO4Cu.5H2O 35g.
SO4H2 5mL
H2O 1mL

*Solución B:
Tartrato doble de Na y K150g
OHNa 40% 300mL
H2O 1mL

Objetivo.
Desarrollar una técnica de extracción de glucógeno a partir de tejido hepático para evaluar cualitativamente la identificación de carbohidratos.

Metodología.
En el primer pasó, se tomó el hígado y con un bisturí, se cortaron trocitos hasta acompletar 5g., que se pesaron en labalanza granataria, luego con ayuda del mortero se maceró el hígado hasta quedar como una pasta y se añadieron 5 mL de TCA al 10%. La mezcla se colocó en un tubo de ensayo y se centrifugó durante 5 minutos a 2000 rpm, se retiró de la centrifuga y se recuperó el sobrenadante, se añadió ETOH al 95% al sobrenadante por el mismo volumen, y se vorteó durante 5 segundos hasta que el glucógeno floculó, se...